Володина В. В., Баринова В. В., Менькова А. В., Сакетова К. Ш., Гнучева В. И., Яковлева Е. П., Лушникова А. А.

 

ФГБНУ «Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства», г. Астрахань Адрес: 414056, Россия, Астрахань, ул. Савушкина, 1 FSBSI Caspian Fisheries Research Institute, Astrakhan Address: 414056, Russia, Astrakhan, Savushkina Sir., 1

 

 

Введение

Благополучие объектов аквакультуры по инвазионным и инфекционным заболеваниям - важнейшее условие, необходимое для нормального функционирования и рентабельности рыбоводного хозяйства. Повышение интенсификации рыбоводного процесса, как правило, приводит к ухудшению экологической и эпизоотической ситуации, а зачастую и к возникновению эпизоотии, что наносит прямой экономический ущерб от потерь, связанных как с гибелью рыб, так и с недополучением рыбного сырья высоко-го качества. В связи с этим для поддержания эпизоотического благополучия рыбоводных хозяйств необходимо не только регулярно проводить профилактические рыбоводно-мелиоративные мероприятия, но и иметь достаточное количество и широкий ассортимент лекарственных средств.

Основой государственного контроля качества и безопасности выпускаемых лекарственных препаратов в области ветеринарии служит лицензирование фармацевтической деятельности, осуществляемой согласно ФЗ «О лицензировании отдельных видов деятельности» от 04.05.2011 г. № 99-ФЗ, с изменениями и дополнениями от 03.08.2018 г. [16]; приказа Россельхознадзора от 19.04.2012 г. № 191 «О лицензировании фармацевтической деятельности», с изменениями и дополнениями от 18.05.2012 г. [10].

Следует отметить, что применение неза-регистрированных препаратов допускается только при проведении их производственных испытаний, при этом препарат должен пройти полный цикл доклинических исследований (определение токсичности для рыб и теплокровных животных, сроков выведения вещества из рыбы, влияние его на воспроиз-водительную функцию, потомство и т. д.).

Для профилактики инфекционных заболеваний рыб на рыбоводных хозяйствах в соответствии с документом «Рекомендации по организации противопаразитарных обработок в рыбоводстве» [12], утвержденным Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 07.10.1999 г., эффективно использовали органический краситель «фиолетовый К», однако при вступлении в силу с 1 сентября 2017 года стандартов на рыбную продукцию в соответствии с требованиями технического регламента Евразийского экономического союза «О безопасности рыбы и рыбной продукции» (ТР ЕАЭС 040/2016) [15] применение данного химиотерапевтического средства запрещено. Запрет на использование красителей в аквакультуре обусловлен опасностью для здоровья человека от употребления рыбы, содержащий в себе данное средство: ряд исследований показал наличие у веществ явных канцерогенных и тератогенных свойств [11].

В связи с этим целью исследований является поиск эффективных противомикозных средств, допустимых к применению в аквакультуре.

Микозы у рыб и икры инициируют плесневые микромицеты порядка сапролегние-вые (Saprolegniales), относящиеся к несколь-ким родам: Achlya, Aphonomyces, Dictyuchus, Leptolegnia, Saprolegnia и др. [4]. По классификации Г. Ц. Айнсворта сапролегниевые грибы принадлежат к царству грибов, отделу Eumycota, классу Oomycetes, порядку Saprolegniales, семейству Saprolegniaceae. Наиболее распространенными и патогенными являются следующие виды: Ach. flagellate, Ach. laevis, D. monosporus, S. ferax, S. mixta, S. parasitica [5]. Температурный оптимум для вышеуказанных видов микроорганиз-мов составляет 15-20°С, как и для развития оплодотворенной икры осетровых рыб. Кроме того, при интенсивном выращивании рыб в системах замкнутого водоснабжения, в отличие от прямоточных систем, возрастает риск распространения инфекционного агента и повышения уровня зараженности рыб. Сапролегнией, как правило, поражается не-оплодотворенная,   травмированная,   физиологически неполноценная икра при инкубировании. При контакте с мертвой икрой, пораженной микромицетами, возможно заражение и живых развивающихся икринок. Потери от этого заболевания могут достигать 90 % [5, 6]. Негативное влияние представителей pp. Saprolegniales и Achlya выражено в разрыхлении поверхности оболочек икры с последующей их деструкцией и вакуолизацией, в ряде случаев гифы прорастают внутрь икринок.

Материалы и методы

Материалом для исследований послужила оплодотворенная икра стерляди {Acipenser ruthenus), пробы воды и налета с поверхности тела карповых рыб, зараженных сапролегнией, и пораженная микромицетами икра осетровых видов рыб (севрюги) в период инкубации. Эксперимент по искусственному воспроизведению сапролегниоза на икре осетровых рыб и апробации веществ в борьбе с микозной инфекцией проводили с февраля по июнь 2018 г. Обработку икры дезинфицирующими средствами проводили методом кратковременных лечебных ванн [2, 11] на 16-й и 21-й стадиях развития [5]. Для оценки воздействия дезинфицирующих средств на развитие эмбрионов определяли стандартные рыбоводно-биологические показатели: процент оплодотворения, развития, выкле-ва предличинок [13], а также процент заражения микромицетами p. Saprolegnia, процент патологий [1]. Показатели определяли с использованием микроскопа Биомед МС-1 Стерео. [4, 6, 7, 17]. При выделении и культивировании микромицетов, изолированных из пораженной икры, воды, использовали методы, применяемые для изучения водных оо-мицетов по Цейпу. Всего было собрано 330 проб и проведено 3630 анализов.

Работа с патогенными микроорганизмами проводилась в стерильных условиях на базе лаборатории ихтиопатологии ФГБНУ «Касп-НИРХ», имеющей лицензию на деятельность, связанную с паразитическими организмами, относящимися к III и IV группам патогенности. Производственную часть эксперимента осуществляли на базе НЭБ «Биос» ФГБНУ «КаспНИРХ».  При  планировании  эксперимента были учтены обработки инкубаци-онных аппаратов, рыбоводного инвентаря хлорамином Б (20 г/м3 в течение 24 часов), регулярные заправки дезинфицирующих ковриков раствором «Forbicid» (0,5 %-ный раствор), а также соблюдение общих правил санитарии в инкубационном цехе.

Первый этап эксперимента включал в себя отработку методики выделения и культивирования «гросс-культуры» грибов р. Saprolegnia на различных приманках. Для этого были отобраны пробы воды и ватообразного налета с поверхности тела карпо-вых рыб, а также зараженная икра севрюги в период их инкубации на НЭБ «БИОС». В лабораторных условиях культивировали микромицеты с помощью «приманок» (проваренное льняное семя, личинки гаммаруса и вареный куриный белок) до образования зооспорангий и гемм. В дальнейшем эксперимент проводили с использованием культур, выделенных на вареном курином белке. «Приманку» с мицелием грибов промывали в стерильной водопроводной воде и помещали в стерильные чашки Петри с такой же водой. Инкубацию проводили при температуре 19-20°С. По мере роста мицелия проводили микроскопию для определения «чистоты» культуры и наличия органов размножения.

Помимо механического способа очистки культур от бактериального загрязнения при-меняли химические - в воду, содержащую мицелий грибов, добавляли растворы молочной и борной кислоты, задавая рН = 7-8.

На втором этапе эксперимента в лабораторных условиях в стерильные чашки Петри с оплодотворенной икрой (по 15 г) вносили стерильную водопроводную воду и «приманку», содержащую культуру грибов на стадии образования зооспор. В контрольные емкости вносили только икру. Опыты проведены при температуре воды 19-20°С, рН = 7-8, что максимально приближено к условиям инкубации на осетровых заводах.

Следующий этап эксперимента включал в себя апробирование химических веществ в производственных условиях. С этой целью для испытания были выбраны формалин, перекись водорода и «Монклавит-1», как средства, обладающие противомикробным, противовирусным и фунгицидным действием. В рыбоводной практике для предупреждения заражения сапролегниевыми грибами икру перед закладкой на инкубацию обрабатывают 0,5 % раствором формалина (экспозиция -3 мин). Ввиду того что формальдегид-токсичное вещество и под его воздействием происходит денатурация белка с образованием новых соединений, было решено использовать предельно низкие концентрации (табл. 1). Ветеринарный йодосодержащий препарат «Монклавит-1» был успешно апробирован на инкубируемой икре радужной форели [4], однако на данный момент отсутствует информация о его эффективности в борьбе с сапролегниозом у осетровых рыб. Перекись водорода разрушает токсины и уничтожает инфекционные агенты, является сильным окислителем и, согласно литературным источникам, может применяться в рыбоводстве [11]. Однако сведения о дозировках и схемах введения вещества отсутствуют.

Для эксперимента 07.06.2018 г. была получена икра (рис. За) от двух самок стерляди весом 3,6 кг и 2,8 кг и оплодотворена спермой от четырех самцов весом 1,8±0,05 кг. Оплодотворенную икру обесклеивали танином (0,7 г/л, экспозиция - 1 мин 40 сек) и закладывали в инкубационные аппараты типа «Осетр» (по 50 г на лоток) (рис 36). В эксперименте было задействовано 13 вкладышей (12 вкладышей на обработку испытуемыми растворами разных концентраций и 1 вкла-дыш - контроль). Стойка, задействованная в эксперименте, находилась в условиях прямотока. Ежедневно проводился гидрохими-ческий анализ воды [3].

В период инкубации провели экспериментальную обработку икры стерляди в ваннах с заданными концентрациями растворов формалина, перекиси водорода и препарата «Монклавит-1» (дважды - на 16 и 21 стадии развития икры), выдерживая икру в течение времени соответственно концентрациям растворов (Таблица 1). Перед обработкой испытуемыми веществами икру на 3-5 мин погружали в физиологический раствор в со-ответствии с технологией, принятой при работе с йодсодержащими препаратами в Финляндии [14]. Для выявления патомор-фологических изменений развивающихся эмбрионов перед ваннами и спустя час по-сле них проводили микроскопию из опыта и контроля.

Параллельно был проведен эксперимент по заражению оплодотворенной икры стер-ляди в чашках Петри в лабораторных усло-виях. В качестве «приманок» использовали вареное куриное яйцо и икру севрюги, по-раженную микромицетами p. Saprolegnia, предварительно промыв двукратно в сте-рильной водопроводной воде. Процесс за-ражения проходил при температуре воды 19-21°С,рН = 8-9.

 Таблица 1

Дозировки испытуемых веществ при экспериментальной обработке оплодотворенной икры стерляди 

Наименование	Экспозиция, мин.	Концентрация раствора, %
Формалин	3	0,0020
	10	0,0010
	15	0,0006
Перекись водорода	5	0,0500
	10	0,0300
	15	0,0100
«Монклавит-1»	10	3,0000
		2,5000
		2,0000
	15	1,5000
		1,0000
		0,5000

 В течение всего периода инкубации осуществляли контроль и фотофиксацию эмбрионального развития стерляди и определения процента развития икры после обработки, для этого в чашку Петри отбирали 200 икринок из каждого лотка и считали количество развивающихся и количество остановившихся в развитии.

Результаты исследований и обсуждение

При выполнении первого этапа эксперимента (выделение сапролегниевых микроми-цетов) активный рост грибов p. Saprolegnia отмечен на вареном курином белке, на семенах льна и личинках гаммаруса зарастание происходило слабо (рис. 1). Из двух выбранных кислот эффективной в борьбе с бактериальным загрязнением была борная кислота.

  

Рис. 1 Первый этап эксперимента. Виды «приманок»: проваренное льняное семя (рост грибов не отмечен) (а); личинка гаммаруса (рост грибов незначительный) (б); вареный куриный белок (отмечен активный рост грибов) (в)

В результате исследований из воды и из пораженной икры севрюги выделены гросскультуры грибов p. Saprolegnia.

Второй этап эксперимента заключался в отработке методики заражения оплодотворенной икры осетровых рыб паразитическими грибами/7. Saprolegnia. Для этой стадии опыта было проведено получение икры от двух самок стерляди, процент оплодотворения икры составил 90 % (согласно приказа № 377 Министерства сельского хозяйства РФ от 25.08.2015 г. средний процент оплодотворения - 60 %). Плодовитость соответствовала 84 шт./г (вес икры -11,9 мг)

Результаты показали, что заражение икры водными паразитическими грибами наступало через 12 часов (на 13-14 стадиях развития икры) (рис. 2). Через 30 часов после заражения на 20-21 стадии развития количество зараженной икры составило 5 %.

  

Рис. 2 Первый этап эксперимента: заражение оплодотворенной икры стерляди микромицетамиp.Saprolegnia («приманкой» служит зараженная икра белуги): икра стерляди через 12 часов после заражения (а); икра стерляди через 14 часов после заражения (б)

Третий этап эксперимента проводили в производственных условиях. Известно, что на развитие сапролегниоза влияет также качество икры, которое в первую очередь, связано с физиологическим состоянием производителей. Плодовитость в среднем соответствовала 68 икринок на грамм, процент оплодотворения - 85 %. Полученные показатели соответствовали норме [9] и являлись косвенным доказательством удовлетворительного состояния производителей стерляди в период нерестовой кампании.

 Параллельно с производственным экспериментом проводили лабораторный по заражению икры сапролегниевыми микромицетами. Визуально начало заражения регистрировали через 11-13 часов после закладки икры (рис. 4). Патологии в пораженной сапролегниозом икре выражались в рыхлости верхней студенистой оболочки, разрушении желточных оболочек, сглаживании границ между ними, прорастании гифов внутрь оболочек. Через 35 часов от начала эксперимента процент поражения опытной икры составлял 7,3 % от общего числа, в результате микроскопирования зараженной икры было выявлено, что она остановилась в развитии. Спустя 7 часов уровень поражения достиг максимума, составив 10,6 % от общего числа икры.

 

Рис. 3. Второй этап эксперимента: получение икры от стерляди (а); инкубация оплодотворенной икры в инкубационных аппаратах типа «Осетр» (б)

Обработку оплодотворенной икры стерляди с зараженными «приманками» в чашках Петри проводили на 16 и 22 стадии по тем же схемам, как и обработку в аппарате. Результаты эксперимента показали, что микромицеты продолжали развиваться после обработок растворами как перекиси водорода, «Монклави-та-1», так и формалина, что указывает на низкую фунгицидную способность испытуемых веществ указанных концентраций.

Оплодотворенная икра, задействованная в эксперименте, при инкубации находилась в условиях прямотока. Гидрохимические показатели воды, приведенные в таблице 2, соответствовали нормативным [8], а также свидетельствовали об оптимальных ус-ловиях (t = 12,0-20,0°С; рН = 7,0-8,3; О2 = 8,0-14,5 мг/л) для развития микромицетов р. Saprolegnia [6].

По результатам третьего этапа - произ-водственного эксперимента, следует отме-тить, что среди выбранных концентраций раствора перекиси водорода при использо-вании 0,03 % выявлено наименьшее количе-ство икры, пораженной микромицетами, но, вместе с тем, имели место случаи развития повреждений в оболочках икры и остановки в их развитии (табл. 3).

Единственный эффективный 3%-ный раствор препарата «Монклавит-1», при использовании которого не регистрировался рост микромицетов, оказывал негативное влияние на оболочки икры, уплотняя их, что влияло на

  Таблица 2 Гидрохимические показатели воды при инкубировании икры стерляди в эксперименте

 

Дата	t°C	рН	О2 мг/л	NH4	NO2	NO3
07.06.2018	18,4	7,6	6,4	0,66	0,12	4,7
08.06.2018	18,5	7,7	5,4	0,66	0,10	6,6
09.06.2018	18,9	7,6	6,7	0,56	0,09	6,4
13.06.2018	19,6	7,6	6,0	0,65	0,15	8,6
14.06.2018	19,7	7,8	7,8	0,43	0,14	5,5
15.06.2018	20,0	7,8	8,0	0,43	0,10	3,8
17.06.2018	20,4	7,9	8,0	0,16	0,07	3,7

 

выклев личинки. Так, при его использовании отмечено наименьшее количество выклюнувшейся личинки (1,8 %). Однако, именно эта концентрация препятствовала заражению здоровой икры от «приманки», и после двукратной обработки раствором этой концентрации процент зараженной икры микромицетами был наименьший (11 %) (табл. 4).

После обработки икры 0,002 % раствором формалина отмечен минимальный уровень микозного заражения, но максимальный показатель отхода (табл. 5). При этом количество развивающейся икры на стадии 23-24 в лотке с контрольной группой составил 76,9 %.

После первичной обработки (16 стадия) 1%-ным, 1,5%-ным и 2,5%-ным растворами препарата «Монклавит-1» зафиксировано увеличение случаев остановки эмбрионального развития (18 стадия) по сравнению с контрольной группой в среднем на 1,6 %.

 При обработке икры остальными растворами препаратов процент остановившейся в развитии икры был меньше, чем в контрольной группе. После обработки растворами перекиси водорода и формалина (18-19 стадии) приблизительно у 5,3 % остановившейся в эмбриональном развитии икры отмечено нарушение структуры оболочки. Увеличение процента остановившейся в развитии икры наблюдалось после второй обработки на 22 стадии развития, особенно при обработке 0,002 % раствором формалина (9,3 %), 1,0 %, 3,0 % раствора «Монклавита-1» (21,4 %, 13,4 % соответственно), увеличение про-цента остановившейся в развитии икры при обработке перекисью водорода было прак-тически одинаковым для всех концентраций раствора (12,4-12,8 %). В контрольной группе, не подвергавшейся обработке, отмечено небольшое увеличение, от 18 к 23—24 стадии, «вставшей» икры, всего на 2,7 % (рис. 5). Со-

 Таблица 3

Показатели выживаемости оплодотворенной икры в период инкубации после экспериментальной обработки растворами перекиси водорода

Концентрация вещества, %	Стадия развития икры	Количество икры, остановившейся в эмбриональном развитии, %	Количество развива­ющейся икры, %	Количество пора­женной икры, % от общего количества в лотке
0,01	18	13	87	18
	23-24	25,8	74,2	30
0,03	18	15	85	3
	23-24	27,4	72,6	7
0,05	18	15	85	14
	23-24	27,3	72,7	30
Контрольная группа	18	20,7	79,3	11
	23-24	23,1	76,9	19

 Таблица 4

Показатели выживаемости оплодотворенной икры в период инкубации после экспериментальной обработки препаратом «Монклавит-1»

Концентрация вещества, %	Стадия развития икры	Количество икры, остановившейся в эмбриональном развитии, %	Количество разви­вающейся икры, %	Количество пора­женной икры, % от общего количества в лотке
0,5	18	14,8	85,2	28
	23-24	16,9	83,1	25
1	18	23,5	76,5	34
	23-24	44,9	55,1	48
1,5	18	21,5	78,5	37
	23-24	22,2	77,8	39
2	18	19,9	80,1	33
	23-24	20,8	79,2	29
2,5	18	21,8	78,2	36
	23-24	23,5	76,5	31
3	18	14,8	85,2	10
	23-24	28,2	71,8	11
Контрольная группа	18	20,7	79,3	11
	23-24	23,1	76,9	19

 гласно приказа № 377 Министерства сель-ского хозяйства РФ от 25.08.2015 г. процент выживаемости икры стерляди при инкубации равен 50 %.

Наибольший уровень патологий зарегистрирован на 23—24 стадии при использовании 0,002 % формалина и 0,03 % и 0,05 % перекиси водорода (рис. 6). Кроме уплотнения оболочки, патологических изменений в икре при обработке ее раствором «Монклавита-1» не зафиксировано.

 В целом поражение микозной инфекцией икры осетровых рыб после двукратной обработки растворами разной концентрации (0,002%-ным формалином, 0,03%-ной перекисью водорода и 3,0 %-ным раствором препарата «Монклавит-1») снижалось на 12,0 %, 8,0 % и 9,0 % соответственно по сравнению с контрольной группой. Остальные концен-трации испытуемых веществ показали себя малоэффективными в борьбе с сапролегни-евыми грибами.  Результаты эксперимента

Таблица 5

 Показатели выживаемости оплодотворенной икры в период инкубации после экспериментальной обработки растворами формалина

 

Концентрация вещества, %	Стадия развития икры	Количество икры, остановившейся в эмбриональном развитии, %	Количество разви­вающейся икры, %	Количество пора­женной икры, % от общего количества в лотке
0,002	18	20,1	79,9	5
	23-24	29,4	70,6	10
0,001	18	13,2	86,8	9
	23-24	20,8	79,2	30
0,0006	18	11,3	88,7	11
	23-24	20,2	79,8	40
Контрольная группа	18	20,7	79,3	11
	23-24	23,1	76,9	19

 

 Таблица 6

Показатели выклева личинок стерляди при экспериментальной обработке икры растворами разной концентрации 

Наименование	Концентрация раствора, %	Выклев личинки, %
Формалин	0,0020	10,0
	0,0010	9,8
	0,0006	16,0
Перекись водорода	0,0500	3,4
	0,0300	34,8
	0,0100	40,7
«Монклавит-1»	0,5	13,8
	1	13,3
	1,5	17,3
	2	4,8
	2,5	3,5
	3	1,8
Контрольная группа	0	87

 

 

свидетельствуют о том, что высокие концентрации апробируемых веществ являются эффективными в борьбе с микромицетами, но при этом отмечается негативное влияние таких концентраций на икру.

Минимальный показатель выклева отме-чен при использовании 3,0 %-ного раствора «Монклавита-1» (1,8 %). Максимальный выклев регистрировался при обработке икры 0,01%-ным раствором перекиси водорода (40,7 %) (табл. 6). В контроле процент выклева личинки составил 87,0 %.

Личинка при переводе из опытных лотков аппарата «Осетр» в пластиковые бассейны хорошо адаптировалась, сразу распределилась в толще воды, хорошо реагировала на тактильный и шумовой раздражители. При клиническом осмотре полученной личинки были выявлены следующие патологии:

- вздутие брюшка (у 2 % личинок, полученной от икры, обработанной 0,002 % раствором формалина);

- кровоизлияния в головном отделе (у 1 % личинок, полученной от икры, обработанной 0,05 % раствором перекиси водорода).

Таким образом, все концентрации раствора формалина способствовали уплотнению оболочки икры, что в дальнейшем препятствовало выходу личинок из оболочки. Через 6 дней наблюдали 100 % гибель личинки, выклюнувшейся от икры, обработанной формалином.

 При использовании всех концентраций (Таб. 6) препарата «Монклавит-1» патологий у личинок не выявлено.

На фоне высокого процента выклева в контрольной группе выклев после обработки икры растворами испытуемых препара-тов выглядит неубедительным, и может сложиться впечатление, что обработка икры от микозной инфекции является нецелесообразной. Следует отметить, что инкубация икры проходила в системе с прямоточным водоснабжением. Данные условия, в сравнении с условиями замкнутого водоснабжения, препятствуют циркуляции микозной инфекции в системе. Обработка икры препаратами ведет к увеличению числа мертвой икры, которая является основным объектом заражения для грибов/?. Saprolegnia, а в контрольной группе это дополнительное условие отсутствовало. Нерестовая кампания на многих рыбоводных заводах начинается ранней весной, когда температура воды в реке составляет 5-6°С, поэтому процесс инкубации проводят в системах замкнутого водоснабжения с постоянной 16-18°С температурой, оптимальной для развития грибов p. Saprolegna, что будет спо-собствовать увеличению процента заражения икры микозной инфекцией.

Результаты эксперимента показали, что использование раствора формалина в любых  концентрациях  нецелесообразно,   так как установлено, что личинка, выклюнувшаяся после обработки икры этим веществом, нежизнеспособна.

 

 

Рис. 4. Микромицеты Saprolegnia: поражение икры стерляди сапролегниозом (а); изолированная культура (б)

 

  

Рис. 5. Третий этап эксперимента. Внешний вид оплодотворенной икры стерляди: отслаивание поверхностного слоя после обработки перекисью водорода (23 стадия) (а); складчатая структура оболочки (22-23 стадия) (б); развитие икры без патологий (26 стадия) (в)

 

Рис. 6. Третий этап эксперимента. Внешний вид оплодотворенной икры стерляди после обработки растворами формалина: икра, остановившаяся в развитии (18 стадия) (а); складчатая структура оболочки (23 стадия) (б)

Апробация ветеринарного препарата «Монклавит-1» показала, что все испытуемые концентрации приводили к переуплотнению оболочек икры, что в дальнейшем влияло на процесс выклева личинки. Наибольшую эффективность в борьбе с сапролегниевыми грибами показал 3,0 % раствор препарата «Монклавит-1», однако при дан-ной концентрации зарегистрирован самый низкий уровень выклева личинки (1,8 %).

Положительный результат отмечен при использовании 0,03 % раствора перекиси водорода (снижение процента заражения икры на 8,0 %; по сравнению с другими испытуемыми растворами высокий процент выклева -34,8 %), при этом отмечали действие раствора на оболочку икры. В связи с полученными результатами целесообразно провести эксперимент с перекисью водорода в условиях замкнутого водоснабжения, изменить и расширить спектр ее концентрации, а также применить другую методику обработки.

Заключение

Для борьбы с микромицетами в период инкубации икры проводилась экспериментальная работа по поиску эффективного препарата -аналога органического красителя «Фиолетовый К». Установлено, что использование формалина в качестве препарата для борьбы с сапролегнией в период инкубации икры осетровых видов рыб нецелесообразно, так как данное вещество в испытанных концентрациях обладает сильным токсическим эффектом (100 % гибель личинок после выклева).

Дальнейшая работа с препаратом «Монклавит-1» должна быть связана с использованием новых концентраций и экспозиций для исключения негативного влияния на оболочки икры.

Применение перекиси водорода перспективно (при обработке раствора концентрацией 0,03 % отмечено наименьшее количество икры, зараженной микромицетами), но имели место патологии при инкубации (остановка эмбрионального развития), поэтому необходимо апробировать растворы перекиси водорода наименьших концентраций при более длительной экспозиции.

Испытания препарата «Монклавит-1» и перекиси водорода должны проводиться в условиях замкнутого водоснабжения для максимального приближения к условиям инкубации икры на рыбоводных заводах.

Список литературы

1. Акимова Н. В. Атлас нарушений в гаметогенезе и строении молоди осетровых. / Н. В. Акимова, В. Б. Горюнова, Е. В. Микодина, М. П. Никольская, Г. И. Рубан, С. А. Соколова, В. Г. Шагаева, М. И. Шатуновский. М.: Изд-во ВНИРО. 2004. 120 с.

2. Головина Н. А. Ихтиопатология. / Н. А. Головина, Ю. А. Стрелков, В. Н. Воронин, П. П. Головин, Е. Б. Евдокимова, Л. Н. Юхименко. М.: Мир. 2003. 448 с.

3. Инструкция по химическому анализу воды прудов: Утв. М-вом рыб. хоз-ва СССР 20.03.84, 2-е изд., доп. М.: Изд-во ВНИИПРХ. 1985. 46 с.

4. Кузнецова Е. В. Применение препарата «Монклавит-1» для лечебно-профилактической обработки икры при сапролегниозе / Е. В. Кузнецова, Т. А. Нечаева, М. В. Мосягина, А. А. Печенкина. // Ученые записки УО ВГАВМ. Т. 52. Вып. 2. 2017. С. 72-76.

5. Ларцева Л. В. Сапролегниоз икры ценных видов рыб при искусственном разведении в дельте р. Волги: таксономия, экология, профилактика и терапия./ Л. В. Ларцева, О. В. Обухова, Ю. В. Алтуфьев. Астрахань: ИП Сорокин Р.В., 2017. 98 с.

6. Ларцева Л. В. Профилактика и терапия сапролегниоза осетровых и белорыбицы при искусственном их разведении /Л. В. Ларцева. Автореф. дис... канд. биол. наук. М., 1987. 24 с.

7. Литвинов М. А. Методы исследования микроскопических грибов пресных и соленых водоемов. / М. А. Литвинов, И. А. Дудка. Л.: Наука, 1975. 150 с. 

8. Отраслевой стандарт ОСТ 16372-87 Вода для рыбоводных   хозяйств.   Общие  требования   и   нормы. От 1 апреля 1988. [утвержден Министерством рыбного хозяйства СССР (Минрыбхоз СССР)] [Электронный ресурс] - URL: https://standartgost.ra/ g/%D0%9E%D0%Al %D0%A2_l 5.372-87.

9. Приказ министерства сельского хозяйства РФ № 377 от 25 августа 2015 г. «О внесении изменений в Методику расчета объема добычи (вылова) водных биологических ресурсов, необходимого для обеспе-чения деятельности рыбоводных хозяйств, при осу-ществлении рыболовства в целях аквакультуры (ры-боводства), утвержденную приказом Минсельхоза России от 30 января 2015 г. № 25».

10. ПриказРоссельхознадзора№ 191 от 19.04.2012г. № 191 «О лицензировании фармацевтической деятельности», с изменениями и дополнениями от 18.05.2012 г.

11. Рахконен Р. Здоровая рыба. Профилактика, диагностика и лечение болезней. / Рахконен Р., Веннерстрем П., Ринтамяки-Киннунен П., Каннел Р. Хельсинки: НИИ охот, и рыб. хоз-ва Финляндии, 2003. 180 с.

12. Рекомендации по организации противопаразитарных обработок в рыбоводстве от 7.10.1999 г.

13. Сборник инструкций и нормативно-методических указаний по промышленному разведению осетровых рыб в Каспийском и Азовском бассейнах. М.: Изд-во ВНИРО. 1986. 271 с.

14. Нечаева Т. А., Кузнецова Е. В., Варюхин А. В., Петропавловский А.  Г.  Способ повышения сопротивляемости икры к заболеваниям [Электронный ресурс] -URL: http://www.freepatent.ru/patents/2421987 - 29.10.2018 г.

 15. ТР ЕАЭС 040/2016. Технический регламент Евразийского экономического союза «О безопасности рыбы и рыбной продукции» (принят Решением Совета Евразийской экономической комиссии 18.10.2016 г. № 162).

16. ФЗ «О лицензировании отдельных видов деятельности» от 04.05.2011 г. № 99-ФЗ, с изменениями и дополнениями от 03.08.2018 г.; приказа Россельхознадзора от 19.04.2012 г. № 191.

17. Флоринская А.А. Материалы по видовому составу и экологии плесниевых грибов - возбудителей сапролегниоза рыб в Ленинградской области. / А. А. Флоринская // Известия ГосНИОРХ, 1969. Т. 69. С. 103-123.