Хламидийные инфекции
Хламидийные инфекции часто протекают в виде латентных, смешанных и шоричных инфекций. В связи с этим при хламидиозах одно из ведущих значений в диагностике, эпизоотологическом обследовании и прогнозировании приобретают иммунологические методы, позволяющие проводить серологический скрининг инфекции. Одним из таких методов является иммуноферментный анализ (ИФА).
ELISA-тест отличается высокой специфичностью, превышающую в несколько рутинные методы диагностики инфекционных болезней. Антитела в ИФА определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном.
К преимуществам ИФА относят также: экспрессность, возможность исследовать мшикомплементарные сыворотки, воспроизводимость, простота постановки реакции и учета ее результатов, стабильность регентов при хранении, автоматизация i и'которых операций и т.д.
Учитывая это, нами была предпринята попытка использовать ИФА для с с дологических исследований подозрительных по заболеванию хламидиозом мелких номашних животных.
В настоящее время применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых компонентов (тест-систем и оборудования).
При конструировании наборов для диагностики инфекционных заболеваний в 11<1>А главным моментом является подготовка антигена. Он должен хорошо мнеорбироваться на твердой фазе (полистирол и др.), с высокой чувствительностью имикмять антитела и не вызывать ложноположительных реакций. Для этого в первую очередь необходимо максимально очистить микроорганизмы от питательной среды ((ммерии) или клеточного дебриса (вирусы). В ИФА могут быть использованы как корпускулярные, так и некорпускулярные антигены. Для разрушения микробных ми1 гок используют обработку детергентами (тритон Х-100, додецилсульфат и не юксихолат натрия и т.п.), ультразвук, автоклавирование и др.
И опытах мы отслеживали динамику хламидийных антител в сыворотках крови * и потных, используя РСК и ИФА. РСК выполняли общепринятым методом. ИФА т.шолняли по непрямому методу на твердой фазе с использованием пероксидазы Чипа в качестве маркерного фермента. Реакцию ставили на микротитрационных инлпшетах из полистирола отечественных, изготовленных на ПО ВНИИ мецмцинской техники (г. Москва) и импортных - фирмы Linbro (США). Учет lip |ультатов ИФА проводили визуально по интенсивности окрашивания реагентов в пупках и инструментально на фотометрах Titertek Multiskan при длине волны 492нм, и iMt-ряя оптическую плотность цветной реакции субстрата (ОП).
Ьыло исследовано более 400 проб сывороток крови мелких домашних животных. 111 >11 этом 34% из них реагировали в ИФА с хламидийным антигеном в мши иостических титрах, в т.ч. 36% - от собак и 31% - от кошек.
Совпадение результатов РСК и иммунопероксидазного теста с хламидийными |циигснами отмечается в 69% случаев. Значение показателя "РСК отри-цательно / МФЛ положительно", равное 31,5%, говорит о более высокой чувствительности
 
последней. При этом в ИФА отдельные полевые сыворотки реагировали в титре 1:1600, что говорит о его высокой чувствительности.
Особого внимания заслуживает изучение сероконверсии у искусственно инфицированных животных (собак и кошек).
Комплементсвязывающие антитела в диагностических титрах через 1 неделю после инфицирования обнаруживались только у отдельных экспериментально зараженных животных, а их максимальный уровень формировался через 2-3 недели. Через 6 недель антитела выявлялись в РСК у всех подопытных животных, но в низких титрах (1:5). Через 8 недель в реакции связывания комплемента реагировали только готдельные особи. Через 10 недель комплементфиксирующие антитела в сыворотках крови искусственно инфицированных собак и кошек не обнаруживались.
Иммуноферментный метод позволял выявлять хламидийные антитела у всех зараженных животных уже через неделю в достаточно высоких титрах (1:100-1:1600). Максимального значения эти титры достигали к 3-4 неделе и обнаруживались у подавляющего большинства искусственно инфицированных собак и кошек на всем протяжении опытов (до 12 недель).
Таким образом, нашими исследованиями установлена пригодность иммуноферментного анализа для ретроспективного серологического скрининга хла-мидиозов мелких домашних животных, особенно в отдаленные сроки реконвалесценции. Использование РСК эффективно в качестве диагностического теста лишь в течение 1-1,5 месяцев после клинического проявления инфекции.