РазместитьВ. КАРАЙЧЕНЦЕВ,
доктор ветеринарных наук
В хозяйствах южного региона Российской Федерации среди крупного рогатого скота на протяжении ряда лет регистрируется заболевание, характеризующееся слезотечением, светобоязнью, гиперемией сосудов конъюнктивы, блефароспазмом, иридоспазмом, серозно-слизистым, а за-тем серозногнойным истечением из пораженных глаз, помутнением и изъязвлением роговицы.
Одной из сложных и актуальных проблем в современной ветеринарной медицине является инфекционный кератоконъюнктивит. Высокий уровень заболеваемости крупного рогатого скота ведет к значительному экономическому ущербу, за счет выбраковки животных, уменьшения молочной продуктивности у коров и привесов у телят, ухудшения нагулов животных, что отрицательно влияет на качественное воспроизводство стада и производство продукции.
По мнению многих исследователей, данное заболевание занимает одно из ведущих мест в инфекционной патологии крупного рогатого скота, которое протекает в форме энзоотии или эпизоотии и внесено в список опасных и экономически значимых бактериальных болезней. Исследованиями последних лет установлено, что инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота вызывается Moraxella bovis.
Имеющиеся литературные данные свидетельствуют о том, что в некоторых странах изучены некоторые вопросы эпизоотологии, разработаны методы изоляции возбудителя из патологического материала, изучены основные биологические свойства Moraxella bovis, разработаны методы диагностики, специфической профилактики и мероприятия по диагностике, профилактике и борьбе с данной болезнью (Pug G. W. 1981, Pinkeye, 1982, Сох P.I. 1984, Novak S., Konradova R., Rejko I. 1985).
В ряде зарубежных стран разработаны и широко используются для специфической профилактики болезни инактивированные вакцины. О положительном эффекте от применения вакцины сообщают многие исследователи. Установлено, что оздоровление неблагополучных хозяйств от инфекционного кератоконъюнктивита воз-можно только при осуществлении комплекса организационно-хозяйственных, зоотехнических, ветеринарно-санитарных, зоогигиенических и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма крупного рогатого скота, а также на предотвращение заражения животных возбудителем болезни Moraxella bovis. Особое место в мероприятиях по борьбе с кератоконъюнктивитом занимает диагностика и специфическая профилактика.
В Российской Федерации, несмотря на широкое распространение инфекционного кератоконъюнктивита, особенно в южных регионах, вопросы микробиологии и иммунологии болезни изучены очень слабо. До сих пор не изучены вопросы этиологии возбудителя, не имеется надежных методов выделения и идентификации моракселл, нет методов диагностики болезни, не изучен иммунитет и не разработаны средства специфической профилактики.
Инфекционный кератоконъюнктивит явля-ется новым, слабо изученным заболеванием, поэтому весьма актуальным является разработка методов выделения, условий культивирования Moraxella bovis, изучение биологических свойств и определения их роли в этиологии болезни и на этой основе — разработка методов диагностики, специфической профилактики и мероприятий по диагностике, профилактике и борьбе с инфекционным кератоконъюнктивитом крупного рогатого скота, вызываемого Moraxella bovis. Этим вопросам и посвящена эта работа.
В хозяйствах южного региона Российской Федерации среди крупного рогатого скота на протяжении ряда лет регистрируется заболевание, характеризующееся слезотечением, светобоязнью, гиперемией сосудов конъюнктивы, блефа-роспазмом, иридоспазмом, серозно-слизистым, а затем серозногнойным истечением из пораженных глаз, помутнением и изъязвлением роговицы. Болезнь проявляется в виде энзоотии, преиму-щественно в весенне-летний период года. Заболевают животные всех возрастов, а широкому и быстрому распространению ее в стаде (на ферме) способствует жаркая солнечная погода, высокая запыленность воздуха помещений и пастбищ, а также комнатные мухи.
Впервые мы наблюдали массовое заболевание с поражением глаз у телят в возрасте от 2 до 6 месяцев в комплексе по выращиванию и откорму колхоза имени Жданова Белгородской области в 1988 г. Была изучена заболеваемость телят кератоконъюнктивитом по месяцам в течение года. Установили, что заболеваемость в январе составила 7%, в феврале — 9%,. в марте — 8%, в апреле — 12%, в мае — 15%, в июне — 47%, в июле — 56%, августе — 69%, в сентябре — 44%, в октябре — 33%, в ноябре — 11% и в декабре — 4%. Таким образом, наивысшая заболеваемость телят регистрировалась в июне, июле, августе и сентябре.
Заболеванию коров, телок и телят инфекционным кератоконъюнктивитом способствуют неблагоприятные факторы (плохие климатические условия, антисанитарное состояние в загонах, не-полноценное кормление, скученность животных, неудовлетворительный микроклимат помещений, различные насекомые и др.), которые ослабляют общую резистентность, а также резистентность конъюнктивы век и глазного яблока.
На протяжении 15 лет проводили бактериологические исследования патологического материала, взятого от больных кератоконъюнктивитом коров, телок и телят. От больных и переболевших инфекционным кератоконъюнктивитом животных, из конъюнктивальных мешков, с поверхности глазного яблока, из пространства за третьим веком выделяли Moraxella bovis, a также различные стрептококки, стафилококки, микрококки, кишечную палочку, протей и другие микроорганизмы.
Moraxella bovis представляет собой грамотри-цательные, некислотоустойчивые, полиморфные, аэробные, неподвижные, короткие и толстые с закругленными концами бактерии, с характерным парным сочленением, некоторые штаммы приближены к кокковидной форме, которые не имеют спор и капсулы и встречается преимущественно одиночно, в парах или коротких цепочках, плохо растут или не дают роста на обычных МПБ и МПА, для роста нуждаются в сыворотке крови крупного рогатого скота и дифосфопиридинну-клеотиде. На кровяном агаре образует круглые, плоские, мелкие, рыхлые, вдавленные в среду, серо-белого цвета колонии, окруженные узкой зоной полного гемолиза (бета-гемолиза), вызывают характерное изменение лакмусового молока — верхний слой темно-синего цвета, средний — светло-синего, а нижний — белого с крупинками пептонизированного молока. В отличие от других видов этого рода (Moraxella lacunata, Moraxella nonliguenfaciens, Moraxella phenylpyravica и Moraxella osloensis), этот вид обладает гемолитической активностью, не редуцирует нитраты, свертывает и пептонизирует лакмусовое молоко.
Для экспериментального воспроизведения инфекционного кератоконъюнктивита у телят культурами Moraxella bovis было сформировано десять групп здоровых телят по 7 голов 2—3-месячного возраста, которые находились в одном помещении. Пять групп телят были опытными и пять групп — контрольными. Для заражения телят в опытных группах были взяты выделенные нами вирулентные для белых мышей гемолитические культуры Moraxella bovis, которые хранились в лабораторных условиях. Тридцати пяти телятам в опытных группах вводили по 0,5 мл суспензии культуры Moraxella bovis (9—10 млрд микробных клеток в 1 см3) в нижний конъюнктивальный мешок левого глаза. Контрольную группу из 35 телят культурами Moraxella bovis не заражали. После заражения за опытными и контрольными телятами в группах вели тщательное наблюдение на предмет заболевания.
Клинические признаки заболевания инфицированных глаз кератоконъюнктивитом в опытных группах телят проявились в каждой из пяти групп: у 5 из 7 телят на 7—19 день и у одного — на 22 день после заражения. Было установлено, что основным признаком заболевания является слезотечение. Затем развивались: светобоязнь, гиперемия сосудов конъюнктивы, блефароспазм, серозно-гнойное истечение из глаз, а также наблюдали помутнение и изъязвление роговицы. У искусственно инфицированных телят заболевание сопровождалось уменьшением аппетита и угнетенным состоянием. Инкубационный период продолжался от 3—7 до 19—22 дней. Температура тела повышалась до 39,8—41,5°С.
Таким образом, при заражении глаз у телят были получены клинические симптомы инфекционного кератоконъюнктивита, которые аналогичны симптомам, наблюдаемым в естественных условиях.
Затем от телят в опытных и контрольных группах стерильными ватными тампонами проводили отбор серозно-гнойного истечения из глаз и экссудата, из которого проводили посев на кровяной агар Хоттингера с 10% дрожжевым экстрактом.
В опытных (пять групп) группах телят с клиническими признаками инфекционного кератоконъюнктивита выделяли культуры Moraxella bovis из всех инфицированных глаз телят. Изолированные культуры Moraxella bovis идентифицировали по культурально-биохимическим свойствам. Таким образом, все 25 выделенных культур Moraxella bovis от телят были идентичны первоначальным культурам Moraxella bovis. В контрольных группах телят культуру Moraxella bovis не изолировали.
Опираясь на материалы проведенных исследований и используя их основные результаты, установили, что диагноз на кератоконъюнктивит устанавливают на основании анализа эпизоотоло-гических, клинических данных, с обязательным условием бактериологического исследования. Результаты исследований показали, что идентификацию исследуемых микроорганизмов, проводят на основании изучения культуральных, морфологических, гемолитических, сахаролитических, протеолитических и редуцирующих свойств. Внутривидовую идентификацию изучают на способности восстановления нитратов до нитритов, разжижения желатина, способности вызывать гемолиз на кровяном агаре, ферментации углеводов, каталазной активности, образования индола, подвижности, свертывания и пептонизации лакмусового молока. Особое место в мероприятиях занимает разработанная диагностика.
Для специфической профилактики заболевания нами разработана технология приготовления вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита с использованием факторов вирулентности возбудителя, которая позволяет получать стерильный, безвредный и иммуногенный биопрепарат.
Определили оптимальные иммунизирующие дозы вакцины и схемы вакцинации для коров, телок, телят (масса 190—230кг), телят (масса 90—130 кг) и изучили ее профилактическую эффективность при инфекционном керато-конъюнктивите в опыте прямого заражения животных.
Установили, что оптимальная прививочная доза вакцины для крупного рогатого скота с массой тела до 180кг (телята, масса 90—130кг) при подкожном введении в области средней трети шеи составляет: первая инъекция — 3 мл, вторая — через 21 день после первой вакцинации в той же дозе — 3 мл. Для крупного рогатого скота с живым весом свыше 180 кг (коровы, телки, телята, живой вес — 190—230 кг) оптимальная прививочная доза вакцины составила первый раз в дозе 3 мл, второй раз — через 21 день после первой вакцинации в дозе 4 мл.
Двукратная иммунизация коров и телят образцами экспериментально вакцины индуцировала выработку специфических антител через 30 дней после иммунизации в титрах — 6—7 log. и 5—6 log, соответственно.
Изучили эпизоотическую эффективность вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита с использованием факторов вирулентности возбудителя в хозяйствах Белгородской области, неблагополучных по инфекционному кератоконъюнктивиту. Учет результатов проводили спустя девять месяцев после вакцинации коров, телок и телят.
Через девять месяцев после вакцинации в условиях колхоза имени Ленина в опытной группе из 432 коров, 276 телок и 191 теленка заболели с диагнозом инфекционный кератоконъюнктивит 49 коров (11,34%), 34 телки (12,32%), 26 телят (13,61%), не заболели - 383 коровы (88,66%), 242 телки (87,68%) и 165 телят (86,39%).
В контрольной группе заболели инфекционным кератоконъюнктивитом 309 коров (71,53%), 215 телок (77,89%) и 169 телят (88,48%), не за-болели - 123 коровы (28,47%), 61 телка (22,10%) и 22 теленка (11,52%) (табл. 1). Уровень антител в сыворотке крови иммунизированных животных через 30—40 дней после введения вакцины составил от 6 до 7 log. и от 5 до 6 log.
В колхозе «Знамя Труда» в опытной группе из 218 коров, 174 телки и 123 теленка заболели с диагнозом инфекционный кератоконъюнктивит 28 коров (12,84%), 16 телок (9,19%), 14 телят (11,38%), не заболели - 190 коров (87,16%), 158 телок (90,81%) и 109 телят (88,62%).
В контрольной группе заболели инфекционным кератоконъюнктивитом 147 коров (67,43%), 129 телок (74,14%) и 102 телят (82,92%), не заболели - 71 корова (32,57%), 45 телок (25,88%) и 21 теленок (17,08%). Уровень антител в сыно-ротке крови иммунизированных животных через 30—40 дней после введения вакцины составил от 6 до 7 log.
Таблица 1 Эпизоотологическая эффективность вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита в колхозе имени Ленина Белгородской области
Таблица 2
Иммунологическая эффективность вакцины для различных возрастных групп крупного рогатого скота через девять месяцев после вакцинации
Определили сроки появления у иммунизи-рованных коров, телок и телят максимально выраженного специфического иммунитета и продолжительность его сохранения.
Время формирования и продолжительность иммунитета, создаваемого опытными образцами вакцины, определяли в опыте прямого заражения коров, телок, телят (масса 190—230кг) и телят (масса 90—130 кг) вирулентной, гемолитической культурой Moraxella bovis (табл. 2).
На основании проведенных исследований установили, что иммунизация коров, телок, телят (масса 190—230кг), телят (масса (90—130кг) формолвакциной гидроокисьалюминиевой против инфекционного кератоконъюнктивита с использова-нием факторов вирулентности возбудителя облада-ет выраженной иммуногенной активностью, спустя 14 суток после второй иммунизации и сохраняется на протяжении девяти месяцев; она стимулирует выработку напряженного иммунитета у всех воз-растных групп крупного рогатого скота и обеспе-чивает им почти полную защиту от заражения, а также вызывает индукцию специфических антител, которые обнаруживаются в высоких титрах (5—6 log) через 14 суток после второй вакцинации и со-храняются на протяжении девяти месяцев.
Следовательно, максимально выраженный вакцинальный иммунитет обеспечивает практически у 86,96% - 91,31% коров, 80,96% - 90,48% телок, 85,19% - 88,89% телят (масса 190-230кг.), 88,89% - 91,67% телят (масса 90-130кг.) надежную защиту от заражения инфекционными дозами вирулентных культур Moraxella bovis, на протялсении девяти месяцев, на которые приходится максимум заболеваемости коров — 60,89% — 73,91%, телок -71,42% - 80,95%, телят (масса 190-230кг.) - 66,66% - 81,48%, телят (масса (90-130кг.) - 77,77% - 86,11% инфекционным кератоконъюнктивитом.
Таблица 3
Эпизоотологическая эффективность формолвакцины гидроокисьалюминиевой против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота в хозяйствах Белгородской области
Таблица 4
Эпизоотологическая эффективность формолвакцины гидроокисьалюминиевой против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота в СХПК «Борец» Сампурского района Тамбовской области
Таблица 5
Эпизоотологическая эффективность формолвакцины гидроокисьалюминиевой против инфекционного кератоконъюктивита крупного рогатого скота в хозяйствах Белгородской и Тамбовской областях
Годность вакцины определили по критериям качества: стерильность, безвредность, иммуно-генность. Стерильность и безвредность вакцины при хранении в течение 15 месяцев стабильно сохраняются. Вакцина сохраняет свои иммуно-генные свойства на протяжении девяти месяцев (срок исследования).
Производственное испытание вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита провели в неблагополучных хозяйствах Белгородской и Тамбовской областей.
Вакцинацию крупного рогатого скота прово-дили (согласно наставлению по применению) в феврале — апреле в 12 районах Белгородской области.
Заключительный учет состояния животных провели спустя девять месяцев после иммунизации (табл. 3).
В 2000—2004 годах провели производственное испытание вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота в СХПК «Борец», Тамбовской области.
Иммунизацию 1862 голов крупного рогатого скота (500 коров, 720 телок, 642 — молодняк крупного рогатого скота) проводили в феврале — апреле месяце. Заключительный учет состояния животных провели спустя девять месяцев после иммунизации (табл. 4).
Реактогенные свойства вакцины оценивали по клиническому состоянию привитых коров, телок, телят в течение 1—2 дней после иммунизации. В результате вакцинации у отдельных животных наблюдали пост-вакцинальные реакции, которые постепенно исчезали, не нанося вреда здоровью животных и не влияя на их продуктивность. Формолвакцина против инфекционного кератоконьюнктивита, изготовленная из штамма Moraxella bovis 891 К, является ареактогенной для крупного рогатого скота в использованных дозах и создает напряженный иммунитет среди вакцинированных животных в неблагополучных хозяйствах на срок до девяти месяцев с момента иммунизации.
Анализ полученных данных по результатам производственного испытания вакцины против инфекционного кератоконъюнктивита с использованием факторов вирулентности возбудителя показал, что ее использование позволило снизить заболеваемость крупного рогатого скота в среднем в 7,7—8,3 раз по сравнению с аналогичным периодом предыдущего года, когда скот еще не вакцинировали (табл. 5).
Кроме того, предлагаемая вакцина обладает высоким профилактическим эффектом, позволяет надежно профилактировать инфекционный кератоконъюнктивит.
Полученные данные серологических исследований сыворотки крови коров, телок и телят, на которых испытывалась экспериментальная вакцина, показали, что ее введение стимулирует выработку в организме коров, телок и телят антител в высоких титрах, которые обеспечивают им защиту от заражения вирулентными штаммами Moraxella bovis. Вакцина снижает заболеваемость коров, телок и телят на 88,63—91,3%.
Мероприятия по борьбе и профилактике с инфекционным кератоконъюнктивитом крупного рогатого скота, вызываемого Moraxella bovis, включают комплекс организационно-хозяйственных, зоотехнических, ветеринарно-санитарных, противоэпизоотических, зоогигиенических и специфических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма крупного рогатого скота, а также на предотвращение заражения животных возбудителем болезни Moraxella bovis через объекты внешней среды и путем передачи мухами и насекомыми. Особое место в мероприятиях по борьбе с инфекционным кератоконъюнктивитом крупного рогатого скота занимает разработанная специфическая профилактика.
