РазместитьВ.А. НОВИКОВ, А.А. ИВАНОВ, А.В.ИВАНОВ, М.Я. ТРЕМАСОВ
ФГУ ФЦТРБ, з. Казань
Среди загрязнителей окружающей среды антропогенного происхождения серьёзную опасность представляют диоксины (полихлорированные дибензодиоксины - ПХДД) и диоксиноподобные вещества (полихлорированные дибензофураны - ПХДФ, полихлорированные бифенилы -ПХБ, полибромированные дибензодиоксины - ПБДД), которые поступают в биосферу во всевозрастающих количествах.
Диоксины загрязняют природную среду, попадая в нее в виде микропримесей с продукцией или отходами технологий. Наиболее токсичным из них является 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксин (2,3,7,8-ТХДД), имеющий обобщенный термин "диоксин".
Механизм его токсического действия изучен недостаточно, специфические средства лечения и профилактики не разработаны, поэтому при отравлении в основном проводят симптоматическую терапию в зависимости от синдрома интоксикации.
При пероральном поступлении диоксина в организм в первую очередь проводят промывание желудка водой, раствором поваренной соли или солевым слабительным с добавлением активированного угля, лечебное действие которого обусловлено ингибированием обратного всасывания диоксинов и усилением их перехода из крови в просвет кишечника, что сопровождается снижением концентрации токсиканта в крови, печени и других органах. Для ускорения выделения ТХДД с желчью применяют холевые кислоты. При накожном поражении загрязненный участок промокают сухим марлевым тампоном и промывают большим количеством воды (Л.А. Федоров, 1993).
Из апробированных в качестве антидотов фармакологических средств при отравлении животных диоксином наиболее перспективными считают препараты из группы комплексонов, сорбентов и нормализующих функцию печени (В.А. Желтов, В.Н. Волков, А.Л. Лавров и соавт, 1995).
В лаборатории техногенных экотоксикантов ВНИВИ в течение ряда лет проводится поиск антидотов в ряду серосодержащих соединений, иммуномодуляторов, средств, регулирующих метаболические процессы.
Цель исследования - изыскание средств, повышающих естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность организма и оказывающих положительное влияние на гемопоэз животных при отравлении диоксином.
Материалы и методы. В двух сериях опытов кроликам давали с кормом 2,3,7,8 -ТХДД в виде масляного раствора в дозах 1/10 и 1/100 ЛД5о- В качестве лечебно-профилактических препаратов использовали димефосфон - диметиловый эфир - 1,1-диметил-3-оксобутил фосфоновой кислоты (оказывает нормализующее действие на метаболические процессы, проявляет антиацидотический, мембраностабилизирующий, противовоспалительный и иммуномодулирующий эффекты) и иммуномодулятор левамизол - 2,3,5,6-тетрагидро-б-фенала-мидазо-[2,1 -Ь]-тиазолагидрохлорид.
До начала затравки диоксином, затем на 10, 20, 30, 40, 50 и 60-е сутки после нее у животных контролировали массу и температуру тела, частоту пульса и дыхания, определяли содержание эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов в крови, выводили лейкоцитарную формулу общепринятыми методами.
Содержание общего белка устанавливали на рефрактометре RL-1, белковых фракций сыворотки крови - фотоколориметрическим способом при помощи КФК-2, активность лизоцима в сыворотке крови - нефелометрическим методом, основанным на его способности растворять мукополисахариды оболочки ряда бактерий, фагоцитарную способность нейтрофилов (фагоцитарный индекс, фагоцитарное число и фагоцитарную емкость нейтрофилов) по С.А.Кост, М.И.Стенко(1974).
Результаты исследований. В первой серии опытов, проведенной на 8 кроликах (2 группы по 4 гол. в каждой) всем животным давали с кормом ежедневно в течение 10 дней диоксин в дозе 3,0 мкг/кг массы тела, что составляет 1/10 ЛД50, а подопытные наряду с токсикантом ежедневно получали димефосфон в дозе 100 мг/кг массы тела.
У кроликов контрольной группы на 4-6-е сутки наблюдали общее угнетение, вялость, понижение аппетита, взъерошенность шерсти, диарею, истощение, 2 из них пали на 27-е и 30-е сутки после затравки. У животных опытной группы, получавших димефосфон, признаки интоксикации наблюдали на 8 - 12-е сутки, при этом температура тела, частота пульса, дыхания находилась в пределах физиологической нормы.
У кроликов контрольной группы число эритроцитов на 20, 30, 50 и 60-е сутки уменьшалось на 22, 31, 14 и 23 %, уровень гемоглобина - соответственно на 14,19,9 и 13 %.
Количество эритроцитов у подопытных животных снижалось на 20-й и 30-й день на 11 и 21 %, а к 50-му дню повышалось до фонового. Концентрация гемоглобина уменьшалась на 30-е сутки на 12 %, затем постепенно возрастала и на 60-е сутки была на 11 % выше фоновой.
Анализируя данные лейкоцитарной формулы крови, выявили, что при затравке диоксином у кроликов уменьшалось число лейкоцитов на 20, 30 и 50-й день соответственно на 15, 23 и 34 % за счет палочкоядерных нейтрофилов, а количество моноцитов увеличивалось на 20, 29 и 26 %. При отравлении диоксином и применении димефосфона число лейкоцитов незначительно снижалось. Уровень моноцитов повышался, но в меньшей степени, чем в контроле, что свидетельствовало о менее тяжелом течении интоксикации.
Таким образом, при отравлении диоксином димефосфон улучшает клинические показатели, нормализует содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина.
Содержание общего белка и альбуминов при введении животным диоксина в течение 10 дней в дозе 1/10 ЛД50 колебалось в пределах фонового, с 20-го до 60-го дня концентрация р-глобулинов повышалась на 50 - 76 %, а у-глобулинов снижалась на 19 - 35 %.
При отравлении диоксином и применении димефосфона количество общего белка на 30-е сутки повышалось на 15 %, в последующем оно постепенно снижалось и на 60-е сутки возвращалось к фоновому.
Содержание альбуминов у подопытных животных возрастало и на 30-е сутки было выше фонового на 21 %. Количество а-глобулинов на 30-й день было меньше фонового на 12 %, а к 50-му дню возвращалось к исходному. Количество р-глобулинов на протяжении опыта существенно не изменялось.
У контрольных кроликов, отравленных диоксином, активность лизоцима в крови на 20, 30, 50 и 60-е сутки снижалась соответственно на 25, 28, 32 и 38 %, а у подопытных животных, получавших с водой димефосфон, на 10, 20 и 60-е сутки возрастала на19,47и30%(Р<0,05).
Во второй серии опытов животным обеих групп диоксин вводили в виде масляного раствора ежедневно в течение 30 дней в дозе 0,3 мкг/кг массы тела (1/100 ЛД5о)-Кроликам опытной группы дополнительно ежедневно выпаивали димефосфон в дозе 100 мг/кг массы тела.
При хроническом отравлении признаки интоксикации у кроликов появлялись на 9 -13-е сутки после затравки, масса тела снижалась на 20-й и 30-й день на 14 и 17 %.
У контрольных животных количество эритроцитов на 50-е и 60-е сутки уменьшалось на 30 и 31 %, уровень гемоглобина на 20, 30,40, 50 и 60-е сутки соответственно на 16, 18, 19, 21 и 23 % по сравнению с фоновым (Р<0,05).
У подопытных животных, которым наряду с диоксином давали димефосфон, масса тела колебалась в пределах исходной. Количество эритроцитов на 10, 20 и 30-е сутки повышалось на 14, 26 и 40 %, гемоглобина - соответственно на 12, 21 и 39 %. К 60-му дню их содержание возвращалось к фоновому.
Количество общего белка в крови контрольных кроликов при затравке диоксином колебалось в пределах фонового. У подопытных животных, получавших наряду с диоксином димефосфон, его содержание увеличивалось на 20 % на 10-е сутки, а на 30-е сутки постепенно снижалось до исходного.
Содержание альбуминов у контрольных животных на 10-е и 30-е сутки уменьшилось соответственно на 26 и 27 %, а в течение последующих 30 сут колебалось в пределах 21 - 25 %. Концентрация альбуминов в сыворотке крови подопытных кроликов на 10-й и 20-й день снижалась на 13 и 16 %, что в 2 раза меньше, чем в контроле.
При отравлении кроликов диоксином содержание р-глобулинов на 10, 20 и 60-е сутки повышалось соответственно на 96, 88 и 95 %. Применение димефосфона несколько нивелировало токсическое действие диоксина, в связи с чем возрастание уровня р-глобулинов у подопытных животных было в 2 раза меньше, чем у контрольных, что свидетельствует о менее тяжелом течении отравления.
Активность лизоцима у животных контрольной группы на 10, 20, 30 и 40-е сутки снижалась соответственно на 12, 15, 31 и 37 %, на 50-е и 60-е сутки таковое составляло 48 и 51 % от фонового. У кроликов опытной группы, которым выпаивали димефосфон, активность лизоцима вначале находилась в пределах исходной, на 30-е и 40-е сутки повышалась на 5 и 16 %, а на 50-е и 60-е сутки соответственно на 17 и 22 %.
Таким образом, пероральное введение димефосфона кроликам оказывало положительное влияние на показатели естественной резистентности, что характеризовалось нормализацией фракционного состава белков, повышением лизоцимной активности сыворотки крови.
Опыты по изучению возможности использования левамизола для коррекции показателей естественной резистентности и иммунобиологической реактивности при отравлении диоксином проводили на кроликах-самцах массой 3,0-3,5 кг, разделенных на 2 группы. Всем животным давали в течение 30 дней масляный раствор диоксина с кормом в дозе 0,3 мкг/кг массы тела, а подопытным дополнительно вводили внутримышечно в течение 3 сут 2,5 мг/кг массы тела 7,5%-ного раствора левамизола. После 4-дневного перерыва препарат в тех же дозах инъецировали еще 2 раза с интервалом в 4 дня. Таким образом, курс лечения включал 9 инъекций.
Установили, что введение левамизола предотвращало нарушение гематологических показателей, вызванных действием диоксина. Так, у кроликов контрольной группы на 20, 30, 40, 50 и 60-е сутки количество эритроцитов уменьшалось на 23, 24, 25, 29 и 31 %, гемоглобина - соответственно на 16, 18, 11, 21 и 22 %. У подопытных животных содержание эритроцитов и гемоглобина в первые 50 сут колебалось в пределах фонового, на 60-е сутки количество их возрастало соответственно на 4,5 и 34 %.
У контрольных кроликов число лейкоцитов на 40, 50 и 60-е сутки снижалось на 35, 15 и 29 %, у подопытных - на 10, 11 и 7 %, т. е. значительно меньше.
У животных контрольной группы количество палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов стабильно уменьшалось и на 60-е сутки оно было ниже исходного соответственно на 34 и 30 %. Число лимфоцитов, начиная с 10 сут, возрастало, а на 60-е сутки превышало фоновый уровень на 26,6 %.
Содержание палочкоядерных нейтрофилов у подопытных животных в первые 20 дней затравки колебалось в пределах фонового, сегментоядерных нейтрофилов понижалось на 10, 30, 40 и 60-е сутки соответственно на 9, 20, 14 и 16 %, т.е. было менее значительным.
Таким образом, пероральное введение диоксина в течение 30 дней в дозе 0,3 мкг/кг массы тела приводило к снижению количества лейкоцитов с преимущественным уменьшением содержания палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, что характерно для развития токсикоза. Применение левамизола способствовало нормализации числа эритроцитов и количественного соотношения отдельных форм лейкоцитов.
В течение опыта фагоцитарная способность лейкоцитов у подопытных кроликов была повышена, а у контрольных животных, не получавших левамизол, начиная с 10-го дня и до конца опыта, была снижена.
Заключение. Введение иммуностимулятора и мембраностабилизатора димефосфона при отравлении диоксином благоприятно влияет на морфологические и биохимические показатели крови, что проявляется незначительным увеличением количества эритроцитов, гемоглобина, оптимизацией лейкоцитарного профиля крови, предотвращением нарушения белкового состава.
Применение левамизола при хроническом отравлении диоксином предотвращает снижение содержания эритроцитов, гемоглобина, положительно влияет на показатели фагоцитоза.
По-видимому, в лечебном эффекте димефосфона немаловажную роль играет антиоксидантное свойство препарата, по предварительным данным, угнетающее перекисное окисление липидов, индуцируемое диоксином.
Treatment of animals at a poisoning with dioxine V.A. Novikov, A.A. Ivanov, A.V. Ivanov, M.Ya.
журнал "Ветеринария" №10 2006
