Х.З. ГАФФАРОВ, А.В. ИВАНОВ, Г.Н. СПИРИДОНОВ, Л.Ш. ДУПЛЕВА, Л.В. ВАЛЕБНАЯ, М.А. ЕФИМОВА
Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных (ФЦТРБ-ВНИВИ)

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота (ИКК, моракселлез), вызываемый бактериями Moraxella bovis, наносит значительный экономический ущерб скотоводческим хозяйствам за счет выбраковки племенных животных, снижения удоев и прироста массы тела, затрат на проведение лечебных и оздоровительных мероприятий.

Частота проявления этой острой высококонтагиозной болезни в Российской Федерации резко увеличивается в летние месяцы, когда крупный рогатый скот находится на пастбище или открытых выгулах. Наиболее высока заболеваемость среди молодняка в группах доращивания и откормочных площадках с большой плотностью поголовья на фоне интенсивного облучения их солнечными УФ-лучами.

Современный уровень интенсификации животноводства в РФ, разноречивость взглядов в отношении этиологии ИКК, отсутствие каких-либо нормативных документов по диагностике и мерам борьбы с ним, завоз из-за рубежа племенного крупного рогатого скота, скрытых носителей возбудителя, перемещение инфицированных животных из одного региона (или хозяйств) в другой (другие) привели к значительному распространению и появлению стационарно неблагополучных очагов ИКК. Если учесть, что жизнеспособные Moraxella bovis сохраняются в глазных и носовых выделениях животных в течение многих месяцев после клинического выздоровления, являясь постоянным источником возбудителя, то проблема организации контроля и борьбы с данной патологией остается актуальной.

Установлено, что особи, переболевшие острой и хронической формами ИКК, резистентны к повторному заражению [2, 6]. В 70 - 90-е годы XX в. во многих странах вопросы специфической профилактики этой болезни были решены. Авторы вакцин подчеркивали, что резистентность вакцинированных животных к заражению обусловлена общими защитными механизмами - воздействием сывороточных и слезных антител, влиянием иммунокомпетентных клеток, концентрированных в лимфоидных органах [ 6, 8 - 10, 13, 14]. В мировой практике для специфической профилактики ИКК используют ряд вакцин, отличающихся по способам получения и по методу проведения иммунизации. Принципы их изготовления менялись в зависимости от научных представлений [4-6, 11, 12, 15].

Цель данных экспериментов - разработка технологии изготовления инактивированной вакцины на основе антигенов гемолитических форм бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1, определение антигенной и иммуногенной активности биопрепарата, а также оценка его эффективности.

При создании вакцины против ИКК крупного рогатого скота исходили из того, что ведущую роль в возникновении этой формы патологии играют бактерии Moraxella bovis. Учитывали также, что герпесвирус типа 1 вызывает острый конъюнктивит и при этом воспалительный процесс не прогрессирует до изъязвления роговицы. Существует мнение, что герпесвирус типа 1 создает особо благоприятную среду для патогенного действия основного возбудителя ИКК [1, 15]. Во внимание также приняли факт широкого распространения и значение герпесвируса в патологии крупного рогатого скота, вызывающего разные клинически выраженные болезни.

Для изготовления ассоциированной вакцины использовали 2 наиболее активных в антигенном отношении штамма Moraxella bovis - Г97-ВНИВИ и ШЗ-01, а в качестве питательной среды - МПА, содержащий 10% дефибринированной крови барана. Культуру проверяли на чистоту, морфологическую и серологическую типичность. Бактериальную взвесь инактивировали формалином, содержащим 37 - 38 % активного формальдегида.

Герпесвирус крупного рогатого скота размножали в перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона коровы (линия TR), выращенной в роллерных 3-литровых бутылях на комбинированной ростовой среде. Полученные вирусные суспензии объединяли и инактивировали формалином при комнатной температуре. Полноту инактивации герпесвируса контролировали тремя последовательными пассажами пробы вирусной суспензии на перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона коровы с интервалом 5-6 сут.

Таблица 1 Содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных

Вакцина состоит из смеси концентрированных антигенов гемолитических форм штаммов Moraxella bovis и культуральной суспензии герпесвируса типа 1 в оптимальных соотношениях. Депонированная гидроокисью алюминия вакцина представляет собой непрозрачную жидкость с белым осадком, который при встряхивании флакона разбивается, образуя гомогенную взвесь бледно-розового цвета.

Безвредность ее проверяли на 10 белых мышах массой тела 17- 18 г, инъекцией им биопрепарата подкожно в дозе 0,5 см3. Вакцину считали безвредной, если животные в течение 10 сут оставались живыми и клинически здоровыми. Иммуногенную активность определяли путем подкожного двукратного введения ее кроликам и молодняку крупного рогатого скота с интервалом 14 дней: телятам в область средней трети шеи по 5 см3, кроликам по 2 см3. Через каждые 14 дней у животных брали кровь и сыворотку исследовали в ИФА для определения уровня специфических антител к антигенам.

Лабораторные испытания показали, что все серии ассоциированной вакцины были стерильны, безвредны и антигенно-активны для животных, не обладали остаточной   вирулентностью   и   их   можно  использовать в производственных условиях для специфической профилактики ИКК крупного рогатого скота. Показатели иммуногенной активности ассоциированной вакцины представлены в таблице 1, из которой следует, что наивысший уровень накопления антител наблюдали на 14-й день после двукратной вакцинации кроликов и телят.

Уровень клеточного иммунитета вак-цинированных животных определяли по процентному соотношению Т- и В-лимфоцитов, которые выделяли на градиенте плотности сахарозы центрифугированием и идентифицировали методом Е-РОКи ЗС3-РОК. После каждой иммунизации происходило  увеличение   процентного соотношения Т- и В-лимфоцитов (табл. 2). Изучая    иммуногенную    активность ассоциированной вакцины на белых мышах, установили, что она защищает после каждой вакцинации 80 % грызунов при их контрольном заражении.

Исследуя на белых мышах превентивные свойства сыворотки крови вакцинированных телят и кроликов, установили, что после 2-й иммунизации они были на 80 % выше, чем превентивные свойства сыворотки крови контрольных животных.

Таблица 2 Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови вакцинироввнных животных (M±m, n = 5)

Таблица 3 Эффективность применения вссоциированной вакцины для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивитв крупного рогатого скотв на основе внтигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвирусв типа 1

В угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах по ИКК крупного рогатого скота с профилактической целью привили весь молодняк в возрасте 30 - 35 дней независимо от времени года, а весь остальной скот - перед выгоном на пастбище. Вакцину вводили подкожно в среднюю треть шеи двукратно с интервалом 21-30 дней в дозах: 3 см3 -1-6-месячным телятам; 5 см3 - молодняку в возрасте от 6 мес до года; 10 см3 - молодняку старше года, коровам и быкам-производителям. Иммунитет у животных формировался на 21 - 30-й день после второй прививки и сохранялся в течение года.

Производственные испытания экспериментальных серий вакцины провели в 9 хозяйствах, неблагополучных по ИКК крупного рогатого скота. Заболеваемость телят до 6-месячного возраста в них составляла 24 - 56 %, молодняка до 12-месячного возраста - 19 - 35 и молодняка старше года и взрослого поголовья - 8 -22 %. Вакцинация животных в этих хозяйствах позволила полностью искоренить ИКК в 6 из них, а в остальных снизить заболеваемость до минимума (табл. 3).

За 2000 - 2006 гг. было изготовлено в ФЦТРБ-ВНИВИ более 100 тыс. доз ассоциированной вакцины против ИКК крупного рогатого скота, которые применили в широком производственном опыте с положительными результатами. При иммунизация животных заболеваемость инфекционным кератоконъюнктивитом снизилась в среднем в 16 раз, что значительно сократило экономический ущерб.

Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I защищена патентом РФ на изобретение. Нормативно-техническая документация на нее одобрена Федеральным агенством по ветеринарному и фитосанитарному надзору, она предложена для внедрения в ветеринарную практику.

Заключение. Разработанная вакцина против ИКК крупного рогатого скота при иммунизации животных значительно активизирует их специфические защитные механизмы и формирует активный иммунитет против данной болезни. При этом нарастают титры специфических антител, повышаются процентное соотношение Т- и В-лимфоцитов и превентивная активность сыворотки крови вакцинированных животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гаффаров Х.З. и др. Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1. - Патент РФ на изобретение № 2264227 (приоритет от 24.02.2004).

2. Штрауб О.Х. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые вирусами герпеса/ Под ред. Д.Ф.Осидзе. -М.: Колос, 1981.

3. Baptista P. //Brit. Vet. J. 1979, 135.

4. Brinton C.C., Goodnow R.A. Vaccine for immunizing cattle against Infectious Bovine Kerato-conjunctivitis infection by Moraxella bovis.- European Patent Application. № 0107845, A2; of 21.10.1983.

5. European patent. Moraxella bovis Bacterin. № 0.146.523; of 07.12.1984. - Bull. V. 85. - № 26.

6. Gwin R. Medicament and method for producing immunity to infections bovine keratoconjunctivitis. -United States Patent. № 4.539.201; of 03.09.1985.

7. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1968, 29.

8. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1971, 32, 6.

9. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1975, 36.

10. Hughes D.E. etal.//Am. J. Vet. Res. 1976,37, 11.

11. Lepper A.W.D. //Austr. Vet. J. 1988, 65, 10.

12. Lepper A.W.D. et al. //Vet. Microbiology. 1995, 45.

13. Pugh G.W. et al. //Am. J. Vet. Res. 1980, 41, 2.

14. Pugh G.W. et al. // Am. J. Vet. Res. 1982, 43, 2.

15. Rebnun W. et al. // Corn. Vet. 1978, 68.

16. United States Patent. Composition for prophylactic treatment of "pinkeye"; №4.254.098, of 03.1981.

журнал "Ветеринария" № 5 2008