A.M. СМИРНОВ, В.М. ПИСАРЕВА, Л.В. РОЩУПКИНА, А.В. КАВЕРИН, Е.Н. МОРОЗОВА, В.В. СВЕТЛИЧКИН
ВНИИВСГЭ

В последние годы расширился ассортимент пищевой продукции и кормов, содержащий генетически модифицированные источники (ГМИ). Общая площадь посевов трансгенных культур в мире в 2005 г. составила 90,0 млн га, т. е. за 9 лет (в 1996 г. - 1,7 млн га) она возросла более чем в 53 раза. Ежегодный импорт товаров, произведенных с использованием методов биотехнологии, оценивают в 650 млн долл. США. Внутренний ежегодный объем российского рынка биотехнологических товаров превышает 1 млрд долл. США. В связи с этим увеличивается вероятность поступления пищевой продукции и кормов, полученных из ГМИ или содержащих компоненты из них, на внутренний рынок Российской Федерации.

В настоящее время разработаны правовые документы, регулирующие генно-инженерную деятельность и использование ГМ-продуктов, которые в обязательном порядке должны проходить экспертизу и госрегистрацию, а продукты, содержащие ГМИ, - маркировку.

В современных регламентах производства продуктов питания и кормов нет ограничений в содержании трансгенных растительных белков, а только требуется их маркировка. Постоянно возрастают темпы замены биологически полноценных животных и растительных белков трансгенными, а зто сверхвыгодный бизнес, создающий условия для фальсификации продукции животного происхождения. В результате российский потребитель съедает значительно меньше мясных и молочных продуктов, детского питания, кормов, содержащих компоненты животного происхождения. Чрезмерная замена компонентов животного происхождения в продуктах и кормах может негативно влиять на здоровье человека и животных.

В настоящее время для определения ГМИ используют методы генной диагностики: полимеразную цепную реакцию (ПЦР), ДНК-микрочиповую технологию и анализ нуклеотидных последовательностей, амплификацию генов с последующей ДНК-гибридизацией, а также иммуноферментный анализ (ИФА). Для индикации ГМИ растительного происхождения применяют ДНК-диагностику, исследуя промоторную область 35S и терминаторную NOS, а также специфичные нуклеотидные последовательности встроенных генов. Эти нуклеотидные последовательности являются областями растительных ДНК, участвующих в трансформации генов, поэтому их взяли за основу при разработке международных и национальных российских стандартов для определения ГМИ: "Сырье и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения". Не исключена возможность применения других участков ДНК для переноса и экспрессии генов. Указанный стандарт разработали в НИИ питания РАМН и Центре "Биоинженерия" РАН.

Качественный и количественный анализ ГМИ проводят с помощью ПЦР. Обнаружение в исследуемой пробе ПЦР- продуктов размером 195 п.н. и 180 п.н. или одного из них, свидетельствует о наличии ГМИ в продукте.

При создании количественного метода наиболее технологичной стала ПЦР в реальном времени, которую проводят с меченными флюоресцентной меткой праймерами. Этот метод позволяет определять продукты реакции непосредственно в течение амплификации без последующего электрофореза.

В основе новейшей технологии - ПЦР в реальном времени - лежит принцип одновременной флюорометрической регистрации результатов реакции по мере накопления ее продуктов в масштабе реального времени. Ускорение сроков реакции и повышение ее специфичности делают этот метод лабораторного анализа по-настоящему экспрессным. Проводя мультиплексную диагностику на отдельных приборах, можно одновременно выявлять несколько агентов в одной пробе. Оборудование для ПЦР-диагностики в реальном времени автоматизированное, компактное и простое в эксплуатации, не требует отдельной чистой комнаты.

В последние годы интенсивно разрабатывают новую технологию ДНК-диагностики ДНК-микрочипами, которую также можно использовать для выявления ГМИ.

Мы оценивали возможность применения наборов SureFood® США для выявления ГМИ и для подтверждения соответствия различных пищевых продуктов. Производство их стандартизовано по международной системе ИСО 9000. Набор SureFood® позволяет ускоренно и эффективно идентифицировать специфичную ДНК промотора 35S и терминатора NOS в составе продовольственного сырья, кормов и готовой пищевой продукции посредством ПЦР, ДНК-гибридизации и детектирования гибридных молекул на основе иммуноферментного анализа. Тест-система серии SureFood® обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Она выявляет до 0,01% ДНК ГМ-происхождения, более практична в исполнении по сравнению с классической методикой с использованием электрофореза проводит компьютерное протоколирование конечного результата и поэтому может быть рекомендована для качественного определения генетически модифицированных продуктов. С помощью этого набора мы обнаружили недекларированные генетически модифицированные примеси в соевом белковом концентрате, арахисовом масле, соевой муке и в импортном майонезе.

Проводя количественную оценку и идентификацию трансгенной ДНК сои линии 40-3-2, устойчивой к глифосату, разработали тест-систему количественного анализа ГМИ, в которой использовали мультиплексную реакцию. В одной пробирке одновременно шли независимо друг от друга две реакции: первая - ген лектина, присутствующий как в ГМ, так и в обычной сое (гибридизационный зонд метили флуоресцентным красителем R6G, а флуоресцентным тушителем служил BHQ2); вторая - фрагмент ДНК, специфичный для сои Roundup Ready линии GTS 40-3-2 (гибридизационный зонд метили флуоресцентным красителем ROX, а флуоресцентным тушителем служил BHQ2).

При обнаружении в образце генов вставки 35S промотор, NOS терминатор и крахмальной синтазы SSIIb проводили идентификацию и количественную оценку трансгенной ДНК по кукурузе линии MON 810, устойчивой к стеблевому мотыльку. В этом случае при применении мультиплексной реакции в одной пробирке одновременно шли две реакции: первая - ген крахмальной синтазы SSIIb кукурузы, присутствующий как в ГМ так и в обычной кукурузе (гибридизационный зонд метили R6G, а флуоресцентным тушителем был BHQ2); вторая -фрагмент ДНК, специфичный для ГМ кукурузы MON 810 (гибридизационный зонд метили ROX, флуоресцентный тушитель - BHQ2).

Мониторинговые исследования около 110 различных продуктов питания и пищевого сырья (колбасы, сосиски, паштеты, консервы, пельмени, фарши, соевые концентраты и изоляты, комбикорма СК-5 и СК-7) с помощью ПЦР в реальном времени на приборах ABI PRIZM-7000 и ABI PRIZM-6100 фирмы Applied Biosystems, США показали, что в отдельных образцах присутствовали недекларированные компоненты из ГМИ.

Журнал "Ветеринария" №2 2008