П.В. Аксенова, кандидат биологических наук,

ММ. Айбазов, доктор сельскохозяйственных наук,

Д.В. Коваленко, кандидат биологических наук
ГНУ Ставропольский НИИ животноводства и кормопроизводства» РАСХН (Ставрополь)

Ключевые слова: зааненская порода, козы, крестар, оваген, полиовуляция, трансплантация, хорулон Сокращения: АЕ— арморовские единицы, ДВ—действующее вещество, ФСГ—фолликулостимулирующий гормон

Введение

В настоящее время на базе опытной станции ГНУ СНИИЖК Россельхозакадемии (Ставрополь) проводятся экспериментальные работы по получению первичных коз-продуцентов, содержащих ген лактофер-рина человека [1]. Ключевой момент метода — разработка эффективной схемы индукции полиовуляции. В то же время высокая вариабельность показателей реакции полиовуляции и несинхронность овулирования созревших фолликулов приводит к получению эмбрионов, находящихся на разных стадиях развития. Большой процент выхода неоплодотворенных ооцитов и непригодных для трансплантации эмбрионов служит главной помехой полномасштабного применения метода [2...5].

Цель исследования

Изучить эффективность применения различных го-надотропных препаратов для индукции полиовуляции у коз-доноров и разработать эффективные схемы индукции полиовуляции.

Материалы и методы

В исследованиях использовали коз зааненской породы в возрасте от 2 до 4 лет. В отдельных экспериментах формировали по две группы интактных животных, фолликулогенез у которых индуцировали по собственным схемам.

Обработка состояла из двух этапов: синхронизации половых циклов у животных (использовали интрава-гинальные пессарии либо ушные импланты, пропитанные прогестагенами) и собственно индукции полиовуляции (посредством различных фолликулостиму-лирующих препаратов).

При обработке применяли следующие гормональные препараты:

•   мегестролацетат, спиртовым раствором которого пропитывали интравагинальные пессарии;

•   крестар (ДВ норгестамет) — ушные импланты и раствор для инъекций;

•   оваген (ДВ овечий питуитарный ФСГ);

•   фоллигон (ДВ сывороточный гонадотропин жеребых кобыл);

•   хорулон (ДВ хорионический гонадотропин) и ФСГ-супер (ДВ свиной ФСГ).

Препараты мегестролацетат и крестар использовали для синхронизации полового цикла; ДВ препаратов, как аналоги прогестерона, создавали в организме условия для имитации лютеиновой фазы полового цикла. За 60 ч до извлечения имплантов (пессариев) животным однократно инъецировали фоллигон. Для подготовки яичников к полиовуляции дробно вводили ФСГ-супер либо оваген. Для синхронизации овуляций использовали хорулон. Общая схема обработки приведена на рис. 1.

Рис. 1. Рабочая схема индукции полиовуляции у коз

Результативность (достижение состояния охоты) фик-сировали рефлексологическим путем (использовали козлов-пробников). Наличие и качество полиовуляции определяли по результатам лапароскопии либо лапарото-мии (наличие и количество желтых тел) и вымывания клеток. К пригодным относили ооциты (эмбрионы) на стадии двух пронуклеусов, двух- и четырехбластомер-ные, без нарушений в строении и целостности обо-лочки, развивающиеся при инкубировании. Особеннос-ти отдельных экспериментов приведены далее.

Результаты

Эксперимент 1. Сравнивали эффективность про-лонгаторов лютеиновой фазы. Для этого козам первой подопытной группы (п = 5) интравагинально ввели пессарии с мегестролацетатом в дозе 30 мг, козам второй подопытной группы (п = 5) — ушные импланты крестар в дозе 1,5 мг норгестамета и однократно инъецировали раствор крестар в дозе 1,5 мг норгестамета и 1,9 мг эстрадиола. Срок введения имплантов — 12 дней, пессариев — 14 дней. Дальнейшая гормональная обработка в обеих группах была одинаковой.

По результатам исследования было отмечено однозначное преимущество препарата крестар: 100 % животных пришли в охоту в течение 24 ч после извлечения импланта при реакции полиовуляции 9,3 (против 50 % животных и поли овуляции 8,0 фол/гол, при использовании пессариев). Таким образом, из двух способов пролонгации лютеиновой фазы полового цикла и синхронизации охоты были выбраны ушные импланты крестар.

Дальнейшие исследования шли по двум параллельным путям: разрабатывались оптимальные схемы с использованием препаратов ФСГ-супер либо оваген в качестве стимуляторов фолликулогенеза.

Эксперимент 2. ФСГ-супер вводили начиная с 60 ч до извлечения импланта, дробно, по убывающей, с интервалом 12 ч. В первой подопытной группе (п = 9) — в общей дозе 24 АЕ/гол, во второй группе (п = 9) - 48 АЕ/гол. Кроме того, всем животным также за 60 ч до извлечения импланта делали однократную инъекцию 500 ед. фоллигона и по прихождении коз в охоту инъецировали им 300 ед. хорулона.

При аппликации данных схем половую охоту проявляли 100 % животных. В первой группе множественная овуляция отмечена у 80 % коз при реакции полиовуляции 6;42 ± 1Д2 желтых тел и выходе пригодных эмбрионов 65,6 %; во второй группе показатели составили: 100%-я охота, 12,55 ± 1,33 желтых тел и 62,1 % пригодных эмбрионов. По результатам экс-перимента с применением ФСГ-супер в качестве рабочей была принята вторая схема.

Эксперимент 3. При разработке схемы с препаратом оваген варьировали дозы препарата, время и кратность введения. Для этого была проведена серия опытов на 41 животном. Козам за 60 ч до извлечения импланта однократно инъецировали 500 ед. фоллигона, а для синхронизации овуляций — 300 ед. хорулона.

Наилучшей оказалась схема с применением ова-гена в общей дозе 6,4 мг/гол., дробно, восьмикратным введением равных количеств гормона. Состояние охоты отмечено у 100 % животных, реакция полиовуляции - 15,5 ± 1,16 желтых тел, выход полноценных эмбрионов - 74,3 %

Эксперимент 4. Задачей следующего эксперимента было сравнить лучшие схемы с применением ФСГ-супер и овагена. Для этого было сформировано две группы, животных обрабатывали по приведенным выше схемам. Результаты эксперимента отражены в таблице. Данный эксперимент подтвердил высокую эффектив-ность обеих схем индукции суперовуляции. Уровень полиовуляции в первой группе составил 14,3 ± 1,54 овуляций на донора, во второй - 12,9 ± 1,46 при выходе пригодных эмбрионов 68,7 и 64,3 % соответственно. Различия между группами были не достоверны.

Не наблюдали «перестимуляции» яичников, кист, а также созревших, но не лопнувших фолликулов. Раз-

Рис. 2. Полиовуляция в яичниках козы при обработке овагеном (а) и ФСГ-супер (б)

меры яичников составили: 2,8 ± 0,26 х 2,1 ± 0,20 см в первой группе и 2,7 ± 0,33 х 2,0 ± 0,24 см во второй. Отмечена разница в диаметре желтых тел: 5... 7 и 2.. .3 мм соответственно (рис. 2).

Выводы

Обе разработанные схемы достаточно эффективны, при этом достигается высокая полиовуляция с большим процентом выхода пригодных эмбрионов. Однако если учесть, что в первой группе козы получили с овагеном всего 5,6 мг овечьего питуитарного ФСГ на голову, а во второй группе с ФСГ-супер — 48 мг свиного ФСГ, то, принимая во внимание риск нарушения го-меостаза организма животного при введении большого количества экзогенного гормона, более предпочтительна первая схема.

Результаты индукции полиовуляции у коз, эксперимент 4

Библиография

1.  Айбазов М.М., Аксенова П.В. Лактоферрин человека от трансгенных коз 1. Особенности физиологии репродукции молочных коз зааненской породы // Вестник ветеринарии, 2010; 3 (54): 12—16.

2.  Трубникова П.В., Айбазов М.М., Милошенко Д.С. Результаты индукции множественной овуляции у зааненских коз // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные, 2007; Спец. выпуск: 37.

3.  Krisher R.L., Gvardauskas F.C., Page R.L., Russel C.G., Canseco R.S., Sparks A.E.T., Velander V.N., Jonson J.L and Pearson R.E. Ovulation rate, zygote recovery and follicular populations FSH-superovulated goats treated with PGF and/or GnRH //Theriogenology, 1994; 41:491—498.

4.  Cameron A.W.N., Battye K.M. and Trounson A.0. Time of ovulation in goats (Capra Hircus) induced to superovulate with PMSG //J. Reprod. Fertil., 1988,136:747—752.

5.  Pendleton R.J, Youngs C.R., Rorie R.W., Pool S.H., Memon M.A. and Godke R.A. Follicle stimulating hormone versus pregnant mare serum gonadotropin forsuperovulation of dairy goats//Small Ruminant Research, 1992; 8:217—247.

Российский ветеринарный журнал №4 2012