Нутталлиоз - трансмиссивное, протозойное заболевание однокопытных, вызываемое беспигментным эндоглобулярным паразитом Nuttallia equi (L.Laveran, 1901). Болезнь протекает остро, подостро и хронически, характеризуется перемежающейся лихорадкой, угнетением, анемией и желтушностью слизистых оболочек (лимонного цвета), нарушением деятельности сердечно-сосудистой системы.
Впервые наблюдал паразитов в крови лошадей Rickman a 1900 г. в юго-западной Африке. Нутталлиоз лошадей и его возбудителя подробно описали в 1901 г. L.Laveran и A.Theiier В 1908-1909 гг. НА Михин и В.Л.Якимов описали это заболевание, наблюдавшееся ими в Херсонской губернии Первоначально возбудитель был назван Piroplazma equi и лишь в 1910 г. Nuttall и Strickland переименовали его в Nuttallia equi (L.Laveran, 1910).
Заболевание лошадей нутталлиозом имеет широкое распространение во многих странах Африки, Европы, Азии. Центральной и Южной Америки, а также а Австралии.
Во всех перечисленных странах нутталлиоз территориально совпадает с пироплазмозом лошадей, но распространение его шире, в особенности в Африке.
Приоритет установления нутталлиоза в России принадлежит Н.А.Михину (1908) и В.Л.Якимову (1909).
В дальнейшем нутталлиоз зарегистрирован и описан; в Закавказье, в Туркестане, в Средней Азии, на Средней Волге, в Западной Сибири, на Северном Кавказе, в Крыму, на Нижней Волге: в Татарстане, Башкирии, на Дальнем Востоке, в Забайкалье, на Украине, в Казахстане, в Беларуссии. В настоящее время эпизоотическое состояние по пироплазмидозам лошадей резко изменилось По данным С.Н.Никольского и др. (1979), на территории Северного Кавказа, ранее относившейся в эпизоотическом отношении к латентной зоне, нутталлиоз встречается, главным образом, в форме носительства и только в отдельных хозяйствах протекает с характерным симптомокомплексом и требуется специфическое лечение заболевших животных. Уменьшилась инвазированность нутталлиями как лошадей, так и клещей-переносчиков, и болезнь чаще регистрируется среди завозного неиммунного поголовья.
Нутталлиозом болеют лошади, ослы, мулы и зебу. Перенос возбудителя на территории СНГ осуществляется иксодовыми клещами в половозрелой фазе: Hyaiioma plumbeum, H.scupense, Dermacentor marginale, D.nuttalli, D.silverum. Rhipicephalus bursa.
Тип передачи - трансфазный в пределах одной генерации насекомых при прерывистом питании. Поэтому, в отличие от пироплазмоза, основным резервентом возбудителя в природе являются больные и переболевшие животные-нутталлионосители.
Характеристика возбудителя N.equi
Обладает большим полиморфизмом (L.Laveran и A.Theiier, 1904), встречаются округлые кольцевидные, грушевидные и в виде мальтийского креста, являющегося характерной формой возбудителя (четыре грушевидные или округлые формы). Паразиты никогда не обнаруживаются в виде парных грушевидных форм, как пироплазмы, а если встречаются в эритроците 2 грушевидные формы: тс они располагаются в противоположные стороны одноименными концами (И.В.Абрамов, 1961).
Величина паразитов также сильно варьирует (от 0,5 до 4 мкм). По величине различают три категории нутталлий: крупные, средние и мелкие К крупным относят паразитов, диаметр которых превышает 2 ! радиуса эритроцита; к средним - диаметр которых в пределах от 1/3 до 2/3 радиуса; к мелким - диаме" которых меньше 1/3 радиуса эритроцита, По мере переболевания животных нутталлий становятся меньше, и при длительной паразитоносительстве в крови циркулируют обычно мелкие. (В.В.Петровский и И В Абрамов, 1982).
 
На территории бывшего СССР циркулируют различные штаммы возбудителя нутталлиоза, отличающиеся по вирулентности и морфологически. Нутталлии из южных зон, переносчиками которых являются клещи H.plumbeum, имеют более крупные размеры и обладают большей вирулентностью, чем нутталлии восточной и средней зоны, передача которых осуществляется клещами D.marginatus, D.pictus (И В Абрамов 1961)
Пораженность нутталлиями эритроцитов в зависимости от стадии болезни сильно варьирует - от единицы дс 60% и более (П.С.Иванова-Гобзем, 1935).
Вне организма хозяина нутталлии бистро погибают. В инвазированной крови при температуре 2-4°
они могут сохранять жизнеспособность до 2-3 недель, а в жидком азоте (-196С'С) сохраняются годами
В В Петосвский    И В Абрамов,   1962).   В  организме  клещей-переносчиков  возбудитель  сохраняется  в
олнсм -делении, в то время как в организме переболевшего животного - в течение всей жизни.
Серологические методы диагностики пироплазмидозов лошадей (пироплазмоз, нутталлиоз) впервые выделены японскими исследователями K.H.Hirato с соавт. для выявления больных пироплазмозом, в ia~ev в '955 г в СССР С.А.Ажиновым при пироплазмозе и нутталлиозе. Однако, практическое .'""з-зсваьие РСК для выявления пироплазмо- и нутталлионосительства у лошадей было исследовано лишь в середине 60-х годов в США W.M.Freichs (1969). С 1968 г. РСК как метод Z/3--OCTHKH пироплазмидозов лошадей была узаконена в США и введено официальное требование  все лошади, ввозимые на территорию страны, подлежали обязательному исследование на пдазмидозы. Положительно реагирующие в РСК животные ввозу не допускались, в последующие требование введено также в Канаде, Австралии, Франции, Финляндии и других странах Европы. 5 гсотвествии с ветеринарным законадательством СССР "Правила отбора, ветеринарной обработки хищтных и птиц, отправляемых на экспорт" (1908 т.4, стр. 284) предусмотрено обязательное исследование племенных и спортивных лошадей на пироплазмидозы.
Исследования по разработке серологической диагностики пироплазмидозов лошадей проводятся в лаборатории протозоологии ВИЭВ с 1973 г. Предложен метод РДСК по выявлению противонутталлийных антител Наставление по постановке и учету реакции длительного связывания комплемента с нутталлийным антигеном ВИЭВ, утверждено ГУВ МСХ СССР 4-го марта, 1976 года.
Обширные исследования по уточнению эпизоотической ситуации по пироплазмидозам лошадей в стране были проведены с 1973 по 1980 гг в лаборатории протозоологии и арахнологии ВИЭВ (Н.И. Степанова, В В.Петровский, Л И Семина) путем исследования образцов сывороток крови лошадей, принадлежащих ипподромам, госциркам и коневодческим хозяйствам из различных зон Союза При этом нутталлионосительство было выявлено у 36% обследованных лошадей. Наиболее неблагополучными оказались конзаводы, ипподромы и другие категории хозяйств Ставропольского края и Ростовской области, в которых число реагирующих на нутталлийный антиген составляет 57 и 44% соответственно.
По данным серологических исследований (в РДСК), проведенным С М Луцук (1973-1976) на Северном Кавказе, нутталлиями инвазировано от 1,2 до 26% лошадей, а инвазированность клещей-переносчиков в неблагополучных хозяйствах составила в среднем 9,5%
Однако за многолетний период исследований было установлено, что в ряде случаев эта реакция не зыявляет комплементсвязывающие антитела у явных носителей возбудителя. В связи с этим возникла необходимость изыскания более чувствительного метода серологической диагностики, для чего мы остановились на методике иммуноферментного анализа.
Метод иммуноферментного анализа уже испытан рядом зарубежных исследователей при нутталлиозе лошадей (C.Soule с соавт., 1984; W.Weiland, 1986).
Материалы и методы
Исходным материалом для получения нутталлийного антигена служила кровь от остро больных нутталлиозом животных с поражеиностью эритроцитов oj. 40 до 70%. Для получения такой паразитомии жеребят-нутталлионосителей спленактомировали согласно методическим указаниям, утвержденным ГУВ МСХ СССР от 24 сентября 1976 г, а затем через 6-8 дней тотально обескровливали Опыты проводились совместно со ст. науч. сотр В.В.Петровским и С.Н.Малышевым. Приготовление антигена, его лиофилизацию и титрацию проводили так же, как при анаплазмозе Лиофилизированине антигены храни¬ли в бытовом холодильнике (при +4" С).
Этот антиген был использован нами при отработке твердофазного метода ИФА для выявления антител в сыворотке крови лошадей для установления нутталлионосительства.
ИФА ставили по разработанному нами наставлению, утвержденному ГУВ Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и закупкам 1 декабря 1989 г.
Результаты исследований
В опыте использовали 8 лошадей, каждой из которых ввели по 50-100 мл крови от -/тталлионосителей. При этом в сыворотке крови носителей обнаруживали комплементсвязывающие
 
антитела в разведении 1:0 и единичные нутталлии в мазках периферической крови. Удаление селезенки у опытных животных проводили в разные периоды - с 36 по 270 день после заражения Обычно на 5-8-й день после спленактомии лошадей обескровливали при высокой паразитемии (табл.1). Как видно из таблицы, лошадь, которую спленэктомировали иа 35-й день после заражения, пала при невысокой паразитемии (10-12%).
Лошади, которых спленэктэмировали спустя 94-180 дней после заражения, дали хорошую паразитемию - 55-70%. Лошади, спленэктомированные на 274-й день после заражения, дали невысокую парааитемию - в пределах 10-15%. Из крови 6-ти лошадей, которых обескровили при высокой паразитемии, получены активные антигены с титрами - от 1:32 до 1:64 в РДСК. Активность антигенов, приготовленных из крови лошадей, давших низкую паразитемию, была слабой и не превышала титра 1:4.
Таким образом, поставленный нами опыт показал, что для получения высокой паразитемии (55-70%) и высоких титров нутталлийных антигенов (1:32-1:64) лошадей необходимо спленэктомировать после 3-6-месячного нуттало доносительства.
Режим постановки ИФА был аналогичен тому, который разработан нами при диагностике анаплазмоза крупного рогатого скота. Приготовлено 6 серий коньюгатов. Титрацию коньюгатов проводили с нутталлийным антигеном, положительными и отрицательными сыворотками лошадей, а также в качестве контроля использовали сыворотки крупного рогатого скота и кроликов. Титры коньюгатов колебались от 1:160 до 1:2560 (1 и 6 серии - 1:160, 2 - 1:320, 4 - 1:640, 3 - 1:120 и 5 - 1:2560) и были специфичны т к. не давали положительных результатов с отрицательными сыворотками крупного рогатого скота и кроликов (табл. 2).
Специфичность метода ИФА подтверждена при исследовании сыворотки крови лошадей больных случной болезнью или ринопневмонией. Ни в одном случае эти сыворотки не реагировали с нутталлийным антигеном в ИФА,
Отработку режима постановки ИФА, а также определение диагностического титра проводили на сыворотках крови экспериментально зараженных нутталлиями лошадей, а также на сыворотках крови поступивших из различных хозяйств страны. Установлено, что диагностическим титром в ИФА является разведение сыворотки 1:50 и 1:100.
Активность антигенов изучали в РДСК и ИФА, В РДСК титры нутталлийных антигенов были 1:32 и 1:64, в ИФА 1:64 и 1:128 Таким образом показатели, полученные в ИФА, в два раза выше, чем в РДСК (табл I).
Таблица 1
Влияние сроков носительства нутталлии,  предшествовавших спленэктомии лошадей,  на
интенсивность инвазии и титры антигенов в РДСК и ИФА

№
животн ого    Сроки паразитоноси-тельства        до спленэктомии (дни)    Сроки обескровлива¬ния            после спленэктомии (дни)    Паразитемия   в день обескровлива¬ния (%)    Титры антигенов         в РДСК    Титры антигенов         в ИФА
1.    35    14    10-12    пала    пала
2.    94    5    55-60    1:32    1:64
3.    109    6    55-60    1:64    1:128
4.    150    7    55-60    1:32    1:64
5.    158    7    65-70    1:64    1:128
6.    180    8    55-60    1:32    -
7.    270    15    10-15    Ниже 1:4    Ниже 1:4
8.    270    15    10-12    Ниже 1:4    Ниже 1:4
Таблица 2
Результаты тирации коньюгатов против глобулинов лошадей

№№    Титры коньюгатов
1.    1:160
2.    1:320
3.    1:120
4.    1:640
5,    1:2560
6.    1:160