М.П.Неустроев1, К.П.Юров2
Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства1, Якутск Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им.
Я. Р Коваленко2, Москва
Представлены результаты разработки специфических средств борьбы с мытом лошадей. Установлена высокая эффективность инактивированной вакцины с иммуномодулятором
Дальнейшее увеличение поголовья \л продуктивности табунного коневодства сдерживают ряд факторов, среди которых значительное место занимают инфекционные и инвазионные болезни. Из них наиболее распространенным и причиняющим ощутимый экономический ущерб является мыт лошадей. По данным отчетов Департамента ветеринарии Республики Саха (Якутия) мыт распространен почти по всей территории региона Болезнь отмечается и в других республиках и областях России и стран СНГ [1.4.5.6.].
Известно, что эпизоотология инфекционных болезней имеет свои краевые особенности, которые необходимо учитывать при планировании профилактических мероприятий. Для разработки эффективных мер лечения и борьбы с мытом лошадей, обоснования методов и сроков его профилактики необходимо прежде всего знание особенностей иммунобиологической реактивности молодняка лошадей.
С учетом вышеизложенного нами поставлена цель разработать научно-обоснованные эффективные специфические средства профилактики мыта лошадей табунного содержания с учетом природно-климатических условий, особенностей ведения коневодства, краевой эпизоотологии и состояния иммунобиологической реактивности организма
Материалы и методы
Исследования проводили в 1985-1997 гг в отделе ветеринарии Якутского НИИ сельского хозяйства Сибирского отделения Россельхозакадемии.
Эпизоотическую ситуацию по мыту изучали в 36 хозяйствах Республики Саха (Якутия) путем анализа статистических материалов Департамента ветеринарии МСХиП РФ (Я) за 1986-1995 гг, а также результатам собственных исследований.
Материалом для бактериологических исследований служили содержимое абсцессов подчелюстных и других лимфатических узлов головы, слизистой оболочки носа, паренхиматозные органы абортированные плоды.
От клинических больных, павших, вынуждено забитых и здоровых лошадей неблагополучных и благополучных хозяйств Республики Саха (Якутия) выделено 42 изолята мытного стрептококка. Изучали морфологические, культуральные, ферментативные, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства выделенных изолятов.
Фагоцитарную активность лейкоцитов, бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови определяли с использованием общепринятых методик.
Моноклопальные антитела к иммуноглобулинам IgM и IgG лошади получены совместно с сотрудниками отдела биотехнологии ИЭВСиДВ. Концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови определяли радиальной иммунодиффузией по Манчини (1964).
Биохимические исследования выполнены в отделах биохимии Якутского НИИСХ и СибНИПТиЖ. Микроэлементы определяли атомно-абсорбционным методом на спектрофотометре AAS-3, а витамины -на инфракрасном анализаторе ИКС-3.
Вакцину против мыта лошадей изготавливали из депонированного штамма "Str. equi H-34". Антигенность, безвредность и иммуногенность вакцины с иммуномодулятором испытывали на белых мышах и жеребятах согласно основным требованиям к производственным контрольным штаммам микроорганизмов [2] и "Положения о порядке испытания и регистрации отечественных фармакологических препаратов" (Приказ № 14 от 2.06.1992, ГУВ МСХ РФ).
В качестве иммуномодулятора использовали полирибонат (поливедрим), разработанный и предложенный НИКТИ биологически активных веществ НПО "Вектор" и ИЭВСиДВ СО РАСХН. Препарат использовали согласно "Временному наставлению по применению полирибоната в ветеринарии в порядке широкого производственного опыта"(1994г).
Результаты исследований
Эпизоотологическими исследованиями установлено распространение мыта во всех улусах Республики Саха (Якутия), занимающихся разведением якутской породы лошадей. Мыт наиболее распространен в Центральной Якутии, где размещено около 80% поголовья. В отдельных улусах этой зоны заболеваемость составила 57,8-62,7%, а летальность - 4,0-5,6%.
При изучении эпизоотологических особенностей мыта среди табунных лошадей в зависимости от возраста в ОПХ «Покровское» установлено, что болезнь чаще проявляется у молодняка 6-12 месячного возраста, Однако болезнь может встречаться и у жеребят-сосунов (1,4%) и молодняка 13-24 -месячного возраста (2,2 %).
Таким образом, у жеребят, переболевших., в возрасте 6-12 месяцев, формируется иммунитет достаточно высокой напряженности, который обусловливает низкий процент заболеваемости в последующие сроки роста и развития.
Проведенные исследования подтвердили стационарность мыта неблагополучных пунктах в условиях Крайнего Севера. Так, в хозяйствах Центральной Якутии мыт регистрируется ежегодно Изменяются только показатели заболеваемости и летальности. В некоторых хозяйствах вспышки заболевания могут отмечаться 2-3 раза в течение одного года. Практически в эпизоотический процесс вовлекается каждое новое поколение лошадей 6-12 месячного возраста.
Мыт может регистрироваться в течение всего периода года Однако максимальное количестве больных жеребят отмечалось в ноябре-декабре месяцах, то есть в период после отъема молодняка этот период заболеваемость в 3,1 раза выше по сравнению с остальными месяцами. Следовательно е условиях Крайнего Севера характерна выраженная ранне-зимняя сезонность мыта лошадей в отличие :" других регионов России и стран СНГ. Выраженная сезонность и стационарность мыта определяется = природно-климатическими и хозяйственными факторами, основными из них являются:
содержание во время отъема жеребят в огороженных участках значительного поголовья лошадей
разных возрастов, в том числе носителей мытного стрептококка вместе с молодняком текущего года
рождения;
несвоевременный отъем, скудное и неполноценное кормление жеребят в холодный зимний
период;
запоздалая диагностика и несвоевременная изоляция больных животных, приводят к
перезаражению жеребят;
резкие перепады температуры воздуха, ветры в ноябре месяце; отсутствие эффективных мер специфической профилактики мыта лошадей.
Таким образом, результаты исследований о влиянии природно-климатических и хозяйственно-экономических факторов на интенсивность и экстенсивность проявления эпизоотического процесса при мыте во многом дополняют данные других авторов [14,5,6]. Мыт может осложняться вторичной инфекцией, вызываемой Sal. abortus equi и Sal. typhi murium. В таких случаях летальность может достигать 22,2%. Впервые в условиях Якутии доказана циркуляция вирусов гриппа, ринопневмонии среди молодняка и кобыл якутской породы лошадей. Установлено, что мыт осложняет вирусные инфекции (грипп и ринопневмонию) или может протекать в виде смешанной бактериальной инфекции, совместно с сальмонеллезом.
Из выделенных 42 изолятов мытного стрептококка отобраны четыре, которые обладают наиболее стабильными морфологическими, культуральными, ферментативными и антигенными свойствами, характерными для Str.equi. Из них штамм Strequi H-34 депонирован ВГНКИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов На данный штамм бактерий Str.equi, используемый для изготовления диагностических и профилактических препаратов против мыта лошадей, получен патент РФ на изобретение (1997г.).
В последующие после отъема жеребят сроки, то есть в ранне-зимний период, отмечено значительное снижение бактерицидной активности сыворотки крови, фагоцитарной способности лейкоцитов иммуноглобулинов 1дС и 1дМ, содержание витаминов А, Е и С, минеральных веществ - фосфора, кальция, магния, марганца и цинка. Снижение уровня иммунологической реактивности и дефицит в организме витаминов и минеральных веществ являются следствием влияния стрессовых факторов, таких как отъем жеребят, резкая смена типа кормления и сильные холода. К снижению уровня естественной резистентности в этот период способствуют сильная пораженность жеребят якутской породы паразитарными болезнями (параскаридоз, гастрофилез и другие), а также заболевание ринопневмонией и гриппом.
Следовательно, в результате снижения уровня иммунологической реактивности создается потенциальная возможность развития инфекционного процесса, вызываемого возбудителем мыта. Как показывают результаты изучения эпизоотологической ситуации по мыту и иммунологической реактивности молодняка, с возрастом наиболее высокая заболеваемость регистрируется в ноябре-декабре месяцах
Нами в предыдущих исследованиях установлена низкая профилактическая эффективность дробного введения бициллина с этонием, предлагаемого сотрудниками КазНИВИ [3]
С учетом вышеизложенного нами изготовлена, испытана и предложена инактивированная вакцина с иммуномодулятором для специфической профилактики мыта лошадей
Из депонированного штамма Str.equi H-34 изготовлена вакцина против мыта лошадей. Бактериальную массу получали в среде Хоттингера с добавлением сыворотки крови лошадей Для накопления протективного М-белка мытного стрептококка производственный штамм пассажировали в гемокультурах и лабораторных животных. Культуры мытного стрептококка инактивировали формалином. В качестве адьюванта использовали гидроокись алюминия. Полирибонат добавляли в вакцину из расчета 0,5 мг/кг живой массы.
Для определения иммуногенной активности вакцину с иммуномодулятором вводили 20-ти белым мышам подкожно в дозе 0,5мл. Через 14 дней после иммунизации 20 вакцинированных и контрольных мышей аналогичной массы заражали подкожно в область спины подтитрованной летальной дозой контрольного штамма Str.equi H-34 В течение 10 дней наблюдения за животными из 20 иммунизированных мышей заболели и погибли 2 мыши. В контрольной группе заболели и погибли 18 белых мышей.
Для испытания вакцины после отъема от кобыл (первая половин ноября), были взяты 73 жеребенка 6-7 месячного возраста. Животных первой группы (27 голов) иммунизировали вакциной с иммуномодулятором, второй группы (21 голов) обработали инактивированной вакциной без иммуномодулятора, третьей группы (25 голов) неиммунизировали (контроль)
Вакцину вводили внутримышечно в дозе 2 мл на 1 голову двукратно с интервалом в 10 дней. Животных предварительно дегельминтизировали ивомеком Через 30 дней после повторной вакцинации по 5 животных из каждой группы были заражены подтитрованной дозой вирулентной культуры После заражения на 10-15 день у всех 5 голов невакцинированных жеребят отмечали клинические признаки мыта (увеличение подчелюстных лимфатических узлов, гиперемия слизистой оболочки носа, слизисто-гнойное истечение из носа). У жеребят, привитых вакциной с иммуномодулятором, случаи заболевания
15
мытом не отмечено. Среди животных, привитых только одной вакциной (2 группа) на 15 день у 1 голс=& наблюдали клинические признаки мыта. При бактериологическом исследовании смыва из носсес/ полости выделен и идентифицирован возбудитель мыта - мытный стрептококк.
В течение всего периода наблюдения (6 месяцев) в различные сроки зимнего и весенье-; содержания мытом заболели в 1 группе -1 голова, во II группе - 2, а в контрольной группе -18 голов
Результаты испытания показали высокую эффективность иммунизации вакциной ; иммуномодулятора. Добавление полирибоната в вакцину против мыта повышает ее иммуногенность --г 20 %.
Введение вакцины с иммуномодулятором вызывало повышение фагоцитарной активное^/ лейкоцитов, содержание общего белка и его глобулиновой фракции, иммуноглобулинов IgG \л IgM которое совпадало с периодом максимального синтеза гуморальных антител.
В 1994-1999 гг проведено производственное испытание вакцины с иммуномодулятором в 5-ти неблагополучных по мыту улусах Республики Саха (Якутия).
Всего иммунизировано 1265 голов молодняка лошадей 6-7 -месячного возраста. Из них в разные периоды наблюдения заболели 48 голов.
Эффективность иммунизации составила96,2%.
Таким образом, результаты производственных испытаний вакцины с иммуномодулятором показали ее высокую эффективность для профилактики мыта лошадей в табунном коневодстве.
Расчеты показали, что при внедрении специфической профилактики экономический эффект на 1 голову составит 69,6 тыс. рублей, на 1 рубль затрат - 6,96 рублей.
Следовательно, разработанный способ профилактики мыта лошадей является не только противоэпизоотическим, но и экономически целесообразным и его следует рекомендовать для внедрения в производство.
В настоящее время Департаментом ветеринарии МСХиП РФ утверждено «Наставление по применению инактивированной вакцины с иммуномодулятором против мыта лошадей» (29.02.2000г.).
Получены 3 патента на изобретение.