Х.З. ГАФФАРОВ, А.В. ИВАНОВ, Г.Н. СПИРИДОНОВ, Л.Ш. ДУПЛЕВА, Л.В. ВАЛЕБНАЯ, М.А. ЕФИМОВА
Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных (ФЦТРБ-ВНИВИ)

Инфекционный кератоконъюнктивит крупного рогатого скота (ИКК, моракселлез), вызываемый бактериями Moraxella bovis, наносит значительный экономический ущерб скотоводческим хозяйствам за счет выбраковки племенных животных, снижения удоев и прироста массы тела, затрат на проведение лечебных и оздоровительных мероприятий.

Частота проявления этой острой высококонтагиозной болезни в Российской Федерации резко увеличивается в летние месяцы, когда крупный рогатый скот находится на пастбище или открытых выгулах. Наиболее высока заболеваемость среди молодняка в группах доращивания и откормочных площадках с большой плотностью поголовья на фоне интенсивного облучения их солнечными УФ-лучами.

Современный уровень интенсификации животноводства в РФ, разноречивость взглядов в отношении этиологии ИКК, отсутствие каких-либо нормативных документов по диагностике и мерам борьбы с ним, завоз из-за рубежа племенного крупного рогатого скота, скрытых носителей возбудителя, перемещение инфицированных животных из одного региона (или хозяйств) в другой (другие) привели к значительному распространению и появлению стационарно неблагополучных очагов ИКК. Если учесть, что жизнеспособные Moraxella bovis сохраняются в глазных и носовых выделениях животных в течение многих месяцев после клинического выздоровления, являясь постоянным источником возбудителя, то проблема организации контроля и борьбы с данной патологией остается актуальной.

Установлено, что особи, переболевшие острой и хронической формами ИКК, резистентны к повторному заражению [2, 6]. В 70 - 90-е годы XX в. во многих странах вопросы специфической профилактики этой болезни были решены. Авторы вакцин подчеркивали, что резистентность вакцинированных животных к заражению обусловлена общими защитными механизмами - воздействием сывороточных и слезных антител, влиянием иммунокомпетентных клеток, концентрированных в лимфоидных органах [ 6, 8 - 10, 13, 14]. В мировой практике для специфической профилактики ИКК используют ряд вакцин, отличающихся по способам получения и по методу проведения иммунизации. Принципы их изготовления менялись в зависимости от научных представлений [4-6, 11, 12, 15].

Цель данных экспериментов - разработка технологии изготовления инактивированной вакцины на основе антигенов гемолитических форм бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1, определение антигенной и иммуногенной активности биопрепарата, а также оценка его эффективности.

При создании вакцины против ИКК крупного рогатого скота исходили из того, что ведущую роль в возникновении этой формы патологии играют бактерии Moraxella bovis. Учитывали также, что герпесвирус типа 1 вызывает острый конъюнктивит и при этом воспалительный процесс не прогрессирует до изъязвления роговицы. Существует мнение, что герпесвирус типа 1 создает особо благоприятную среду для патогенного действия основного возбудителя ИКК [1, 15]. Во внимание также приняли факт широкого распространения и значение герпесвируса в патологии крупного рогатого скота, вызывающего разные клинически выраженные болезни.

Для изготовления ассоциированной вакцины использовали 2 наиболее активных в антигенном отношении штамма Moraxella bovis - Г97-ВНИВИ и ШЗ-01, а в качестве питательной среды - МПА, содержащий 10% дефибринированной крови барана. Культуру проверяли на чистоту, морфологическую и серологическую типичность. Бактериальную взвесь инактивировали формалином, содержащим 37 - 38 % активного формальдегида.

Герпесвирус крупного рогатого скота размножали в перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона коровы (линия TR), выращенной в роллерных 3-литровых бутылях на комбинированной ростовой среде. Полученные вирусные суспензии объединяли и инактивировали формалином при комнатной температуре. Полноту инактивации герпесвируса контролировали тремя последовательными пассажами пробы вирусной суспензии на перевиваемой культуре клеток трахеи эмбриона коровы с интервалом 5-6 сут.

Таблица 1 Содержание специфических антител в сыворотке крови вакцинированных животных

           

Животные

 

1итрыантител (М±т , n=b) вИФА

 

 

кMoraxellabovisштаммуГ97-ВНИВИ

к Moraxella bovis штаммуШЗ-01

кгерпесви

эусуштаммуТК-ВИЭВ-В2

довакци­нации

через 14 дней послевакцинации

довакци­нации

через 14 дней послевакцинации

довакци­нации

через 14 дней послевакцинации

1-й

2-й

1-й       |      2-й

1-й               2-й

Кролики Телята

280± 82,15 5280,00± 1252,19

2720+ 1117,32 10240,00± 1752,00

1360,00+ 5440,00+ 558,56     1073,00 -      6400,00± 8320,00± 0,00       2146,00

160,00+ 0,00

160,00+     576,00+ 0,00         208,61 896,00±    960,00± 175,27      226,27

Вакцина состоит из смеси концентрированных антигенов гемолитических форм штаммов Moraxella bovis и культуральной суспензии герпесвируса типа 1 в оптимальных соотношениях. Депонированная гидроокисью алюминия вакцина представляет собой непрозрачную жидкость с белым осадком, который при встряхивании флакона разбивается, образуя гомогенную взвесь бледно-розового цвета.

Безвредность ее проверяли на 10 белых мышах массой тела 17- 18 г, инъекцией им биопрепарата подкожно в дозе 0,5 см3. Вакцину считали безвредной, если животные в течение 10 сут оставались живыми и клинически здоровыми. Иммуногенную активность определяли путем подкожного двукратного введения ее кроликам и молодняку крупного рогатого скота с интервалом 14 дней: телятам в область средней трети шеи по 5 см3, кроликам по 2 см3. Через каждые 14 дней у животных брали кровь и сыворотку исследовали в ИФА для определения уровня специфических антител к антигенам.

Лабораторные испытания показали, что все серии ассоциированной вакцины были стерильны, безвредны и антигенно-активны для животных, не обладали остаточной   вирулентностью   и   их   можно  использовать в производственных условиях для специфической профилактики ИКК крупного рогатого скота. Показатели иммуногенной активности ассоциированной вакцины представлены в таблице 1, из которой следует, что наивысший уровень накопления антител наблюдали на 14-й день после двукратной вакцинации кроликов и телят.

Уровень клеточного иммунитета вак-цинированных животных определяли по процентному соотношению Т- и В-лимфоцитов, которые выделяли на градиенте плотности сахарозы центрифугированием и идентифицировали методом Е-РОКи ЗС3-РОК. После каждой иммунизации происходило  увеличение   процентного соотношения Т- и В-лимфоцитов (табл. 2). Изучая    иммуногенную    активность ассоциированной вакцины на белых мышах, установили, что она защищает после каждой вакцинации 80 % грызунов при их контрольном заражении.

Исследуя на белых мышах превентивные свойства сыворотки крови вакцинированных телят и кроликов, установили, что после 2-й иммунизации они были на 80 % выше, чем превентивные свойства сыворотки крови контрольных животных.

Таблица 2 Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови вакцинироввнных животных (M±m, n = 5)

    

Срокиммунизации

 

 

Кролики

 

Телята

 

 

 

Лимфоциты^%

 

Лимфоцить

 

 

Т-

 

В-

 

Т-

 

в-

Довакцинации После 1-йвакцинации После 2-йвакцинации

53 57 59

90±0 10+0 20±0

92 54 67

16,82+0 21,40±0 24,90+0

,42 ,48 ,48

54,50±0,39 56,20±0,51 59,40+0,59

17,00±0,39 20,00±0,51 25,22+0,72

Таблица 3 Эффективность применения вссоциированной вакцины для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивитв крупного рогатого скотв на основе внтигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвирусв типа 1

Номер

Количество

Заболеваемостьживотных, %

Уровеньпоствакцинальныхантител

хозяйства

животных

 

 

всывороткекровивИФА

 

 

доприменения

послеприменения

кгерпесвирусу

кбактериям

 

 

вакцины

вакцины

типа 1

Moraxella bovis

1

1319

16-45

3-6

1024±429,3

2816±660,9

2

173

8-38

2

1536±286,2

3840±905,1

3

1148

13-32

-

1280±369,5

3072±970,6

4

2560

22-56

-

1408±525,8

3328±858,6

5

213

14-24

-

1536+305,05

3840±905,1

6

884

19-38

-

1080±446,8

2816+701,1

7

1393

8-42

3-6

880+219,1

2080±536,6

8

1600

10-36

2

1120+219,1

2240+657,3

9

659

12-39

-

1360±558,6

2560+438,2

 

В угрожаемых и стационарно неблагополучных хозяйствах по ИКК крупного рогатого скота с профилактической целью привили весь молодняк в возрасте 30 - 35 дней независимо от времени года, а весь остальной скот - перед выгоном на пастбище. Вакцину вводили подкожно в среднюю треть шеи двукратно с интервалом 21-30 дней в дозах: 3 см3 -1-6-месячным телятам; 5 см3 - молодняку в возрасте от 6 мес до года; 10 см3 - молодняку старше года, коровам и быкам-производителям. Иммунитет у животных формировался на 21 - 30-й день после второй прививки и сохранялся в течение года.

Производственные испытания экспериментальных серий вакцины провели в 9 хозяйствах, неблагополучных по ИКК крупного рогатого скота. Заболеваемость телят до 6-месячного возраста в них составляла 24 - 56 %, молодняка до 12-месячного возраста - 19 - 35 и молодняка старше года и взрослого поголовья - 8 -22 %. Вакцинация животных в этих хозяйствах позволила полностью искоренить ИКК в 6 из них, а в остальных снизить заболеваемость до минимума (табл. 3).

За 2000 - 2006 гг. было изготовлено в ФЦТРБ-ВНИВИ более 100 тыс. доз ассоциированной вакцины против ИКК крупного рогатого скота, которые применили в широком производственном опыте с положительными результатами. При иммунизация животных заболеваемость инфекционным кератоконъюнктивитом снизилась в среднем в 16 раз, что значительно сократило экономический ущерб.

Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I защищена патентом РФ на изобретение. Нормативно-техническая документация на нее одобрена Федеральным агенством по ветеринарному и фитосанитарному надзору, она предложена для внедрения в ветеринарную практику.

Заключение. Разработанная вакцина против ИКК крупного рогатого скота при иммунизации животных значительно активизирует их специфические защитные механизмы и формирует активный иммунитет против данной болезни. При этом нарастают титры специфических антител, повышаются процентное соотношение Т- и В-лимфоцитов и превентивная активность сыворотки крови вакцинированных животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гаффаров Х.З. и др. Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1. - Патент РФ на изобретение № 2264227 (приоритет от 24.02.2004).

2. Штрауб О.Х. Инфекции крупного рогатого скота, вызываемые вирусами герпеса/ Под ред. Д.Ф.Осидзе. -М.: Колос, 1981.

3. Baptista P. //Brit. Vet. J. 1979, 135.

4. Brinton C.C., Goodnow R.A. Vaccine for immunizing cattle against Infectious Bovine Kerato-conjunctivitis infection by Moraxella bovis.- European Patent Application. № 0107845, A2; of 21.10.1983.

5. European patent. Moraxella bovis Bacterin. № 0.146.523; of 07.12.1984. - Bull. V. 85. - № 26.

6. Gwin R. Medicament and method for producing immunity to infections bovine keratoconjunctivitis. -United States Patent. № 4.539.201; of 03.09.1985.

7. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1968, 29.

8. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1971, 32, 6.

9. Hughes D.E. et al. //Am. J. Vet. Res. 1975, 36.

10. Hughes D.E. etal.//Am. J. Vet. Res. 1976,37, 11.

11. Lepper A.W.D. //Austr. Vet. J. 1988, 65, 10.

12. Lepper A.W.D. et al. //Vet. Microbiology. 1995, 45.

13. Pugh G.W. et al. //Am. J. Vet. Res. 1980, 41, 2.

14. Pugh G.W. et al. // Am. J. Vet. Res. 1982, 43, 2.

15. Rebnun W. et al. // Corn. Vet. 1978, 68.

16. United States Patent. Composition for prophylactic treatment of "pinkeye"; №4.254.098, of 03.1981.

журнал "Ветеринария" № 5 2008