Б.П. Экви,
РВЖ СХЖ

Сокращения: ГП — гистопрепарат(ы); М — мазок

Из-за наличия в составе клеточной стенки большого количества липидов кислотоустойчивые бактерии (в т.ч. многие микобактерии) плохо окрашиваются обычными анилиновыми красителями, но прочно удерживают карболовые красители. Этот принцип лежит в основе метода окраски Циля-Нильсена, проводимого в следующей последовательности:

1.  Фиксация М на воздухе или метиловым спиртом.

2.  Окрашивание раствором карболового фуксина Циля при 4-кратном подогревании над пламенем до образования паров — 2...5 мин.

3.  Промывание водой.

4.  Обесцвечивание 3%-м раствором соляной кислоты, приготовленным на 96%-м этиловом спирте — 3...5 с.

5.  Промывание водой с последующим ополаскиванием 96%-м этиловым спиртом — 1...2 раза.

6.  Контрастное окрашивание метиленовым синим — 3...5 мин.

7.  Промывание водой, высушивание и микроскопирование.

В итоге туберкулезные микобактерии окрашиваются в рубиново-красный цвет, а кислото- и спирто-устойчивые сапрофиты становятся синими.

Флюоресцентное окрашивание облегчает обнаружение кислотоустойчивых бактерий как в М, так и в ГП.

В 1938 г П.К.Х. Хагеман предложил с этой целью окрашивать ГП аурамином. Основные этапы данного метода —окрашивание флюорохромом и травление 0,5%-м раствором калия перманганата или 10%-м раствором хлорида железа, что обеспечивает потемнение фона. В отечественной лабораторной практике для окрашивания М нашла применение модификация этого метода, известная под названием «флюоресцентное окрашивание микобактерий по Поляковой» (цит. по [1]). Автор пользовалась двумя вариантами флюорохромных красителей: 1) смесью 0,1%-го водного раствора аурамина ОО и 0,01%-го водного раствора родамина С; 2) смесью аурамина ОО (0,12 г), карболовой кислоты (5 мл) и дистиллированной воды (до 100 мл).

При окрашивании методом П.К.Х. Хагемана в ГП сильно деформируются клетки и тканевые структуры, что не всегда приемлемо. В связи с этим A.M. Роулатт и Л.А. Корнер предложили следующий метод окраски ГП:

1.  Осветление ксилолом и обезвоживание в градиенте этилового спирта срезов зафиксированного в формалине материала.

2.  Окрашивание теплым (60 °С) феноловым раствором аурамина! — 15 мин.

3.  Промывание водой.

4.  Дифференциация 0,5%-м раствором соляной кислоты, приготовленным на 70%-м этиловом спирте, — 1 мин.

5.  Промывание в проточной воде — несколько минут.

6.  Окрашивание 0,01%-м водным раствором основного фуксина — 30 с.

7.  Промывание в проточной воде, обезвоживание в трех сменах абсолютного этилового спирта до приобретения препаратом светло розового цвета.

8.  Просветление двумя сменами ксилола.

При проведении флюоресцентной микроскопии в синем спектре от кислотоустойчивых бактерий исходит светло-желтое свечение, а фон и ткани окрашены в красно-оранжевый цвет. Только коллаген имеет желтый цвет, но его легко отличить от бактерий.

БИБЛИОГРАФИЯ

1.  Шуляк Б.Ф. Руководство по бактериальным инфекциям собак, т.1. Грамположительные бактерии. - М.: Олита, 2003.

2.  Hagemann P.K.H. Munch Med Wschr, 1938, 85, 1066.

3.  Rowlatt A.M., Corner L.A. The use of a conventional counterstain with the auramine fluorescent stain for acidfast organisms, to obtain better histological contrast. Austr Vet J, 1981, 57, 53—54.

Российский ветеринарныйф журнал №4 2008