Огородник Н. 3.
Институт биологии животных Национальной академии аграрных наук Украины
Введение
Промышленная технология производства продукции животноводства, с одной стороны, создает все условия для комплексной автоматизации и механизации основных процессов, а с другой - вступает в противоречие с физиологическими функциями организма, которые развились в процессе фило- и онтогенеза [6]. Высокая концентрация поголовья, безвыгульное содержание, частые перегруппировки, нарушение норм кормления, изменения микроклимата в помещениях приводят к возникновению в организме животных стресс-реакции, уменьшающей сопротивляемость к неблагоприятным условиям [5]. Указанные факторы вызывают снижение иммунитета и способствуют возникновению болезней, а в дальнейшем становятся причиной снижения продуктивных и репродуктивных качеств животных [2].
Укрепление здоровья животных, улучшение качества продукции невозможно без повышения их природной резистентности к факторам внешней среды. Иммунобиологическую реактивность организма животных можно стимулировать путем обеспечения их биологически-активными веществами, создания оптимальных условий содержания, применения прогрессивных методов повышения иммунной и антиоксидантной систем за счет использования препаратов, в составе которых содержатся витамины [3,4].
Установлено, что использование липосомальных форм препаратов более эффективно, нежели введение фармакологических средств в общепринятых формах [8]. Преимуществом липосомальных препаратов является их сродство с мембранами клеток, что предопределяет их высокую биодоступность. Липосомам свойственно удерживать внутри и на поверхности липидного слоя вещества любой химической природы с их постепенным выделением, что существенно продлевает срок действия препарата и предотвращает преждевременное разрушение и выведение из организма [7]. Благодаря селективному проникновению из крови в ткани липосомальные препараты владеют целенаправленной специфичностью, способны изменять фармакокинетику лечебных веществ, что значительно повышает их эффективность [8, 10]. Учитывая преимущества липосом, следует обратить внимание на разработку препаратов в форме липосомальных эмульсий и применять их не только в медицине, но и в ветеринарной практике.
Целью работы было изучение влияния жирорастворимых витаминов A, D3, E в форме масляного раствора («Тривит») и их липосомальной формы («Липовит») на показатели естественной резистентности ремонтных свинок.
Материалы и методы
Экспериментальная часть работы выполнена в условиях фермерского хозяйства на ремонтных свинках крупной белой породы 6-месячного возраста, которых разделили по принципу аналогов на контрольную и две опытные группы, по 5 животных в каждой группе. Свинкам контрольной группы вводили изотонический раствор натрия хлорида, животным первой опытной группы - препарат «Тривит», животным второй опытной группы - препарат «Липовит». Препарат «Липовит» разработан в лаборатории иммунологии Института биологии животных Национальной академии аграрных наук. Препараты вводили свинкам внутримышечно, дважды с интервалом в 10 суток, в дозе 3 мл. Для иммунологических исследований от ремонтных свинок брали кровь из ушной вены в день инъекции препаратов (I), на 7-е сутки после инъекции (II), а также - на 4-е (III) и 11-е сутки (IV) после повторной инъекции препаратов.
В образцах крови определяли фагоцитарную активность нейтрофилов, фагоци-тарный индекс и число (Гостев В. С, 1950), лизоцимную (Дорофейчук В. Г., 1968) и бактерицидную активность сыворотки крови (Марков Ю. М., 1968), содержание циркулирующих иммунных комплексов (Чернушенко Е. Ф., Когосова П. С, 1981). Статистические вычисления результатов проводили с использованием биометрических методов вариационного непараметрического анализа при помощи прикладной программы Microsoft Excel пакета Microsoft Office Professional XP.
Результаты исследований и обсуждение
Основным принципом оценки иммунного статуса животных является количественная характеристика и оценка функциональной активности не специфической резистентности, в том числе клеточного и гуморального иммунитета. В большинстве случаев иммунные реакции проявляются изменениями функци-онального состояния иммунокомпетентных клеток, активацией неспецифических и специфических механизмов защиты [1].
Исследования показателей неспецифической резистентности, в частности фаго-цитарного звена иммунитета ремонтных свинок, представлены в таблице 1. Вместе с определением фагоцитарной активности нейтрофилов крови ремонтных свинок, с целью изучения степени интенсивности фагоцитоза, мы вычисляли фагоцитарный индекс и фагоцитарное число. Как свидетельствует анализ полученных результатов, фагоцитарная активность нейтрофилов крови у свинок контрольной и опытных групп существенно не отличалась. При этом в крови свинок вто-рой опытной группы на 4-е и 11 -е сутки после повторного введения препарата «Липовит» фагоцитарный индекс был больше (р < 0,05), чем в крови свинок контрольной группы. Поскольку фагоцитарный индекс характеризирует количество захваченных микроорганизмов одним активным фагоцитом, полученные данные свидетельствуют об активирующем влиянии витаминов A, D3, E, введенных ремонтным свинкам в форме липосомальной эмульсии, на способность сегментоядерных нейтрофилов к фагоцитозу микробных клеток. Наряду с этим обнаружено достоверное увеличение фагоцитарного числа (р < 0,05) у ремонтных свинок второй опытной группы, сравнительно с контрольной, на 4-е сутки после повторного введения препарата «Липо-вит». Из этих данных следует, что введение ремонтным свинкам витаминов A, D3, E в виде липосомальной эмульсии приводит к повышению клеточных механизмов защиты в их организме. Касательно первой опытной группы животных необходимо заметить, что препарат «Тривит» после повторной инъекции на 4-е и 11-е сутки повышал фагоцитарное число соответственно на 9 и 3,6 % (р < 0,5).
Результаты исследований лизоцимной активности сыворотки крови ремонтных свинок показали (табл. 2), что на 4-е сутки после повторного введения липовита и тривита разница с контрольной группой была выше (р < 0,05). Согласно полученным данным, после введения липовита лизоцимная активность сыворотки крови ремонтных свинок второй опытной группы, в сравнении с контролем, увеличилась и на 7-е сутки (р<0,05).
Наличие в крови специфических веществ, которые принимают участие в удалении и обезвреживании патогенных частиц и микробных клеток, отображает степень бактерицидной активности сыворотки крови. В крови свинок второй опытной группы этот показатель на 7-е сутки после введения и на 4-е сутки после повторного введения препарата «Липовит» был заметно выше (р < 0,05), чем в контроле. Также достоверные разницы
бактерицидной активности сыворотки крови наблюдались у свинок первой опытной группы на 4-е сутки после повторного введения препарата «Тривит» (р < 0,01). Повышение бактерицидной активности сыворотки крови свинок может быть результатом влияния жирорастворимых витаминов на В-лимфоциты и иммуноглобулины, которые проявляют опсонизирующее действие на бактерии, связывают и активируют комплемент, способствуют индукции интерферона и синтезу лизоцима [9].
Проведенными исследованиями установлено увеличение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови свинок на 7-е сутки после инъекции им препарата «Три-вит». Достоверное повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов (р < 0,05) в крови свинок первой опытной группы наблюдалось только в указанный период исследований с последующим их снижением к концу опытов к уровню, отмеченному в начале опытов.
Реакции иммунной системы включают комплексную взаимосвязь между мононуклеарными фагоцитами и Т-лимфоцитами, что приводит к активации гуморальных механизмов защиты, в том числе к синтезу антител [1]. Образование циркулирующих иммунных комплексов является результатом специфического взаимодействия антигенов с антителами. Увеличение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови свинок первой опытной группы в начале экспериментов можно объяснить антиген-антитело стимулирующим влиянием компонентов препарата. В случае с «Липовитом» следует отметить, что липосомы сами по себе лишены свойств антигена, а размещенные внутри липосом вещества надежно защищены от контакта с иммунной системой, поэтому не вызывают развития ответных реакций со стороны организма.
По-видимому, увеличение показателей гуморального звена неспецифической резистентности организма ремонтных свинок является результатом комплексного действия жирорастворимых витаминов, за счет чего повышается функциональная активность клеток крови, ответственных за продукцию опсонизирующих факторов, при этом про-исходит усиление кооперативного взаимо-действия клеточных компонентов иммунной системы.
Выводы
Введение ремонтным свинкам препаратов «Тривит» и «Липовит» способствовало повышению естественной резистентности их организма, о чем свидетельствует уве-личение фагоцитарного числа и индекса (р < 0,05), а также повышение лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови (р < 0,05-0,01). Установлена большая эффективность применения препарата «Липовит» с целью повышения неспецифической резистентности организма ремонтных свинок, чем препарата «Тривит».
Список литературы
1. Никулин, Б. А. Оценка и коррекция иммунного статуса / Б. А. Никулин. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 376 с.
2. Смирнов, В. Динамика поколений свиноматок по продуктивности и адаптации / В. Смирнов // Свиноводство. - 2005, № 2. - С. 12-14.
3. Спиричев, В. Б. Теоретические и практические аспекты современной витаминологии / В. Б. Спиричев // Проблеми харчування. - 2006, № 2 (11). - С. 18-36.
4. Тикшайкин, Р. Н Крезооферран и естественная резистентность ремонтных свинок / Р. Н. Тикшайкин,
А. Н. Федонин, А. С. Федин, Д. III. Гайирбегов, С. В. Логинов // Технические и естественные науки: проблемы, теория, практика: сборник научных трудов. - Саранск, 2010. - Вып. XIII. - С. 85-87.
5. Титов, В. Н. Биологическая функция стресса, врожденный иммунитет, реакция воспаления и артериальная гипертония / В. Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008, № 12. - С. 3-16.
6. Толоконцев, А. Воспроизводительные и адаптационные качества свиней /А. Толоконцев // Животноводство России. - 2010, № 4. - С. 33-37.
7. Хромов, О. С. Експериментальне обгрунтування застосування фосфатидилхолшових лшосом у медициш / О. С. Хромов, А. I. Соловйов // Фармаколопя та лжарська токсиколопя. - 2008. - Вып. 4 (5). - С. 83-88.
8. Chaize, В. Encapsulation of enzymes in liposomes: high encapsulation efficiency and control of substrate permeability / B. Chaize, J. P. Colletier, M. Winterhalter, D. Fournier // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. - 2004, V. 32, № 1. - P. 45-48.
9. Lai, Y. H. Mouse IL-13 enhances antibody production in vivo and acts directly on В cells in vitro to increase survival and hence antibody production / Y. H. Lai, T. R. Mosmann // J. Immunol. - 1999, V. 162. - P. 78-87.
10. Stathopoulos, G. P. Pharmacokinetics and adverse reactions of a new liposomal cisplatin (Lipoplatin): phase I study / G. P. Stathopoulos, T. Boulikas, M. Vougiouka at all // Oncol. Rep. - 2005, V. 13. - P. 589-595.