Печать
Категория: Хирургия собак

С.С. Меткалф, И.М. Ганн, К.А. Чемпнесс.
Institute of Reproduction and Development, Monash Medical Centre, Clayton (Австралия)

Сокращения: Б — биопсия; ИК — извитой (тые) каналец (льцы); ИО — искусственное осеменение; Псе — придаток семенника; РИА — радиоиммунологический анализ; Се — семенник(и); ЩФ — щелочная фосфатаза; Эя — эякулят

Сообщение о двух случаях

Обеим собакам давали сухой корм, регулярно прививали их против парвовирусного энтерита, чумы плотоядных и аденовирусных инфекций, а также обрабатывали против гельминтов (пирантелом, фебантелом, празиквантелом и ивермек-тином) и блох (люфенуроном). Животные не переносили тяжелых заболеваний, и им не давали каких-либо препаратов, которые могли бы повлиять на сперматогенез.

Первая собака. Кобеля породы Лабрадор в возрасте 21 мес обследовали для установления причин бесплодия после того, как вязавшаяся с ним сука не забеременела.

Пальпацией подтвердили наличие обоих Се в мошонке, но они были небольшого размера и мягкими. Нарушений со стороны предстательной железы при ее трансректальной пальпации не выявили. Отсутствовали и другие изменения клинического состояния животного. Кобель проявлял нормальное либидо, а при мастурбации — эрекцию. Спермиев полученного от него Эя не обнаружили. Активность ЩФ спермы составила 60,72 МЕ/л.

УЗИ показало отсутствие очаго-вых поражений в Се, ПСе и предстательной железе. После введения седа-тивного препарата (медетомидина) получили методом перкутанной аспи-рационной Б пробы из каждого семенника собаки, использовав для этого иглу диаметром 6 мм.

При гистологическом исследовании биоптатов семенников выявили небольшое число семявыносящих канальцев, выстланных клетками Серто-ли, но герминативные клетки отсут-ствовали. Морфология интерстици-альных клеток оставалась нормальной. Признаков воспаления не было.

В полученной спустя 3 мес третьей пробе эякулята спермин также отсутствовали, что указывало на низкую вероятность восстановления плодовитости и послужило показанием к кастрации кобеля. Оба спермиопровода лигировали на уровне наружного пахо-вого кольца.

Перед операцией у собаки в пробирку без антикоагулянта взяли пробу крови. Ее центрифугировали при 300 g, в течение 15 мин получили сыворотку, которую хранили при -80 "С для определения концентрации тестостерона.

Определили массу Се и Псе после очистки от крови и поместили их в фиксатор Боуэна. При гистологическом исследовании тонкие срезы тканей окрашивали гематоксилин-эозином и по Шифу (рис. 1).

Гистологическое исследование предусматривало анализ тон-ких (5 мкм) срезов, сделанных в сагиттальной проекции вдоль срединной линии взятых органов [ 1]. В головках ПСе констатировали отсутствие половых клеток, легкую вакуолизацию и дегенерацию эпителия, в то время как в Се контрольного 12-ме-сячного Лабрадора эти изменения не выявили. Дегенерация, при которой сохранялись только клетки Сертоли и аккумулировался протеиновый экссудат, охватила 90 и 94 % канальцев в обсле-дованных срезах правого и левого семенников соответственно (рис. 2). Сперматогонии и сперматоциты присутствовали в остальных канальцах, но их созревание прекращалось на стадии сперматоцитов. В Се содержались чрезмерно мелкие интерсти-циальные клетки и скопления лимфоцитов (рис. 3).

Вторая собака. Второго кобеля из того же помета иссле-довали в возрасте 2 мес по тем же причинам, что и первого. Анамнестические данные, результаты клинического обследования (в том числе пальпации Се и предстательной железы, а также УЗИ), цитологического и гистологического анализов Се и Псе в обоих случаях были сходными (см. рис. 1). Активность ЩФ эякулята, в котором отсутствовали спермин, составила 83 МЕ/л. Признаков аплазии ПСе и закупорки семявыносящих канальцев при осмотре Се после кастрации не выявили. Часть ИК была выстлана только клетками Сертоли, а в некоторых из них находились сперматогонии. Наряду с нормальной интерстициальной тканью в Се обнаружены участки с ги-потрофированными клетками Лейдига.

Обсуждение

Азооспермией называют полное отсутствие спермиев в Эя [2]. В описанных выше случаях ее диагностировали по результатам исследования проб спермы, полученной от кобелей с интервалом в 3 мес. Поскольку у собак первичные сперматогонии превращаются в зрелые спермин в течение 55...70 дней, важно повторно исследовать Эя через достаточно большой интервал времени, в противном случае диагноз на азооспермию может оказаться ошибочным.

семенники собаки

Рис. 1. Удаленные семенники: а — первой собаки; б — второй собаки; в — здорового кобеля той же породы

Рис. 2. Срез Се первой собаки, в котором виден И К, состоящий только из клеток Сертоли. Окраска по Шифу. 1 деление = 100 мкм

Рис. З. Срез Се первой собаки, в котором видно скопление лимфоцитов вокруг дегенери-рованного ИК. Ок-раска гематокси-лин-эозином. 1 деление = 200 мкм

Центрифугированием концентрируют содержащиеся в Эя спермин и другие клетки. Авторы не предпринимали попыток выделить бактерии, грибы или микоплазмы из Эя, поскольку в последних отсутствовали клетки, а клиническое обследование не дало оснований предполагать инфекционную этиологию азоос-пермии. Низкая активность ЩФ спермы кобелей указывала на отсутствие в ней секрета ПСе, что могло быть обусловлено заку-поркой семявыносящих протоков, ретроградной эякуляцией, ги-поплазией или аплазией ПСе [3]. Признаков аплазии последних или закупорки семявыносящих протоков в удаленных посред-ством кастрации Се второй собаки не выявили. Результаты цито-логического исследования биоптатов Се указывали на остановку развития и созревания герминативных клеток. Правильная пер-кутанная аспирационная Б выгодно отличается от резекционной Б края семенников простотой и быстротой выполнения, отсутствием необходимости в общей анестезии и наложении хирургических швов, а также меньшими травматизацией тканей и кровотечением [4]. Получение данным методом непригодного для цитологического исследования материала может быть обусловлено техническими ошибками при Б или состоянием биопсируемой ткани [5]. Такое случается при Б половых желез 6... 11 % мужчин, страдающих азооспермией [6]. Резекционная Б дает более пригодный для гистологического исследования материал, но сопряжена с риском осложнений (кровоизлияния, инфекции, орхит, сперматогранулема, отек мошонки, кратковременное или перманентное нарушение сперматогенеза) [2,5].

При работе с Се лучше использовать фиксатор Боуэна, чем забуференный формалин. Последний вызывает сокращение ИК и другие артефакты, затрудняющие оценку патоморфо-логических изменений.

Скопления лимфоцитов вокруг ИК часто находят при аутоиммунных и лимфоцитарных орхитах. Но такие морфологические изменения трудно интерпретировать. В двух описанных выше случаях аккумуляцию лимфоцитов наблюдали только вокруг разрушенных ИК с дегенерировавшей базальной мембраной, но не вокруг дегенерировавших ИК с интактной базальной мембраной.

Наличие образованных только клетками Сертоли ИК может быть следствием нарушения их развития или полного разрушения герминативных клеток [7,8]. Дифференцировать такие патологические процессы сложно, если не тестировать повторно взятые с продолжительным интервалом времени биоптаты или не использовать дополнительные методы ди-агностики (например, электронно-микроскопическое, имму-ногистохимическое и хромосомное исследования).

Концентрация тестостерона в крови первого и второго ко-белей, которую определяли накануне кастрации с помощью РИА, составляла 5,8 и 6,5 нМ/л соответственно. Между этим показателем и изменениями спермы отсутствует тесная кор-реляция [9]. Активность данного гормона в сыворотке крови здоровых собак может варьировать от 1,7 до 34,7 нМ/л, а при крипторхизме она составляет 0,3...6,9 нМ/л [2]. У кобелей с нормальным либидо, способных совершать вязку, концентрация тестостерона в крови редко бывает ниже 1,4 нМ/л [10]. В описанных случаях можно было предположить уменьшение численности клеток Лейдига в строме Се кобелей. Однако по-скольку концентрация тестостерона в Се бывает в 50... 100 раз выше, чем в крови, то по активности этого гормона в сыворотке крови нельзя судить об изменении его концентрации в половых железах или о нарушении сперматогенеза [9].

У лабрадоров азооспермия часто ассоциирована с хромосом-ными нарушениями, в том числе реверсией, химеризмом и моза-ицизмом половых хромосом [11]. Обычно в таких случаях проявляются гипоспадия и крипторхизм [12]. Масса Се у обоих страдавших азооспермией лабрадоров оказалась ниже массы половых желез здорового (контрольного) кобеля той же породы. Пониженные масса и размеры Се этих животных подтвердили предположение об их гипоплазии/атрофии (таблица). Такие изменения могут иметь серьезные негативные последствия, приводя к снижению объема половых желез и качества Эя [13]. Их не зарегистрировали в четырех поколениях предков обоих кобелей.

 

Массасеменниковипридатков, атакжеихсоотноше­ниеуобследованныхиконтрольнойсобак, г

Показатели

Первая собака*

 

Вторая собака*

 

Контрольная собака*

ПравыйСе

6,04

5,73

12,83

ПравыйПсе

3,59

4,07

3,25

Соотношение массСе : Се + Псе, °/

62,7

58,5

79,8

ЛевыйСе

6,89

6,94

13,49

ЛевыйПсе

3,52

3,63

3,13

Соотношение массСе : Се + Псе, °/

66,2

о

65,6

81

* Масса тела первого, второго и контрольного накануне кастрации составляла 31, 32 и 28 кг   кобелей соответственно.

Обследованных животных получили с помощью ИО хра-нившейся в замороженном виде спермой. Из пяти родившихся щенков одна сука погибла на третий день жизни (причина ее гибели осталась неизвестной); вторая — в 12-недельном возрасте. Постмортально у нее диагностировали дисплазию почек, сопровождавшуюся почечной недостаточностью, и вто-ричный гиперпаратироидизм. Оставшуюся в живых суку сте-рилизовали посредством овариогистерэктомии. В процессе операции нарушений развития мочеполовой системы у собаки не выявили. В трех пометах их отца (у 8 сук и 13 кобелей) и трех пометах их матери (6 сук и 9 кобелей) нарушения реп-родуктивных функций отсутствовали.

Раньше не было сообщений о случаях азооспермии у кобе-лей, полученных посредством ИО хранившейся в замороженном виде спермой. Сперма, которой осеменили мать обследованных кобелей, была импортирована из США. Известно, что инфекция Brucella canis может приводить к развитию острых или латент-ных аутоиммунных орхита и эпидидимита кобелей. Возбудитель передается в период бактериемии от матери плодам, что стано-вится причиной гибели последних или рождения инфицирован-ных щенков [14]. В настоящее время эта инфекция в Австралии редка. Ее вероятность низка, потому что у донора спермы, ис-пользованной для ИО матери обоих кобелей, отсутствие бру-целлеза подтверждено сертификатом.

Есть сообщения о наследственной азооспермии у лабрадо-ров ретриверов [15, 16]. В первой из упомянутых публикаций бесплодие диагностировали у двух собак в 2...3-летнем возрасте. Обоих кобелей до развития у них азооспермии успешно использовали в племенных целях. У них была общая мать, но принадлежали они к разным пометам. В отличие от описанных случаев у названных животных в 80 % ИК нормально протекал сперматогенез, о чем свидетельствовали результаты гистологического исследования их половых желез. Однако в их Се обнаружили скопления лимфоцитов вокруг дегенерировавших ИК, содержавших сперматогонии и/или одни только клетки Сертоли. Как и в описанных случаях, изменения клеток Лейдига в Се этих собак были минимальными.

Помимо лабрадоров наследственный интерстициальный лимфоцитарный орхит описан у биглей. Предполагается, что в патогенезе заболевания принимают участие аутоиммунные факторы, что подтверждается наличием у пораженных кобелей лимфоцитарного тироидита [17].

БИБЛИОГРАФИЯ

1.  Wreford N.G. Theory and practice of stereological techniques applied to the estimation of cell number and nuclear volume in the testis. Microsc Res Tech, 1995,32,423—43.

2.  Feldman E.C., Nelson R.W. Canine and feline endocrinology and reproduction. 2nd edn. Saunders, Philadelphia, 1996, 722.

3.  Johnston S.D. Performing a complete canine semen evaluation in a small animal hospital. Vet Clin North Am Small Anim Pract, 1991, 21, 545-549.

4.  James R. W., Heywood R., Fowler D.J. Serial percutaneous testicular biopsy in the beagle dog. J Small Anim Pract, 1979, 20, 219-228.

5.  Dahlbom M., Makinen A., Suominen J. Testicular fine needle aspiration cytology as a diagnostic tool in dog infertility. J Small Anim Pract, 1997, 38, 506-512.

6.  Rajwanshi A., Indudhara R., Goswami A.K. et al. Fine needle aspiration in azoospermic males. Diagn Cytopathol, 1991, 7, 3—6.

7.  Hagopian A., Jackson J.J., Carlo D.J. et al. Experimental allergic aspermatogenic orchitis. III. Isolation of spermatozoal glycoproteins and their role in aspermatogenic orchids. J Immunol, 1975, 115, 1731-1743.

8.  Schulze C, Holstein A.F. Human Sertoli cells under pathological conditions. In: Russell L.D., Griswold M.D. (Eds). The Sertoli cell. Cache River Press, Florida, 1993,598-610.

9.  Olson P.N. Clinical approach to infertility in the stud dog. Proc Ann SocTheriogenology. Denver, 1984, 33.

10. Larsen R.E., Johnston S.D. Management of canine infertility. In Kirk R.W. (Ed). Current veteri - nary therapy VII. Saunders, Philadelphia, 1980, 1226-1231.

11. Meyers-Wallen V.N., Bowman L., Acland G.M. et al. Sry-negative XX sex reversal in the German Shorthaired pointer dog. J Hered, 1995, 86, 369-374.

12. Meyers-Wallen V.N. Genetics of sexual differentiation in dogs and cats. J Reprod Fertil Supp, 1993, 47, 441-452.

13. Wildt D.E., Baas E.J., Chakrobarty P.K., Wolfe et al. Influence of inbreeding on reproductive performance, ejaculate quality and testicular volume in the dog. Theriogenology, 1982, 17, 445-452.

14. Greene С E., George L.W. Canine brucellosis. In Greene C.E. (Ed). Clinical microbiology and infectious diseases of the dog and cat. Saunders, Philadelphia, 1984,646—662.

15. Allen W.E., Longstaffe J.A. Spermatogenic arrest associated with focal degenerative orchitis in related dogs. J Small Anim Pract, 1982, 23, 337-343.

16. Olson P. N., Schultheiss P., Seim H. B. Clinical and laboratory findings associated with actual or suspected azoospermia in dogs: 18 cases (1979-1990). JAVMA, 1992,201, 478-482.

17. Pathology and familial incidence of orchitis and its relation to thyroiditis in a closed beagle colony. Exp Mol Pathol, 1976, 4, 142-158.

 

РВЖ    МДЖ №1-2005