Замораживание спермы быка в гранулах. Разбавленную сперму выдерживают в холодильнике при  температуре +2...+4оС в течение 4–5 ч. Затем в  теплоизолированную емкость или широкогорлый сосуд Дьюара наливают на 2/3 жидкий азот. Фторопластовую пластину обтирают спиртовым тампоном,  опускают  в жидкий азот  в  широкогорлом  сосуде Дьюара и охлаждают в течение нескольких минут до прекращения кипения азота. Затем пластину поднимают к верхнему краю сосуда и после испарения азота  протирают ее сухим стерильным ватным тампоном и с помощью  бюретки,  шприца или разливочной машины разливают сперму в лунки пластины. Пластина в это время должна иметь температуру минус 160...170С. После того как в последней лунке сперма затвердеет, пластину опускают ближе к жидкому азоту  и  выдерживают  на  расстоянии 5–10 см от поверхности азота в течение 1–2 мин.  Далее пластину погружают на 1 мин в жидкий азот, где происходит дальнейшее охлаждение гранул и отделение их от пластины. Затем пластину поднимают из жидкого азота до верхнего уровня сосуда,  сгребают гранулы в охлажденный  контейнер и переносят в сосуд Дьюара на длительное хранение.

Этот способ расфасовки хранения спермы в настоящее время используется крайне редко.

Замораживание спермы быка в полипропиленовых соломинках (пайетах). После финального разбавления спермы ЛГЖ-средой при температуре 18–20С сперму расфасовывают в стерильные полипропиленовые соломины внутренним диаметром 2 мм, емкостью 0,25 мл.  Соломины должны быть промаркированы. Это делается на машине М6-ММС-2 (или других, более современных машинах) с помощью сменяемого клише, изготовляемого для каждого быка, или М6-ММС-3 кодовой надписью набираемых цифр. На соломине печатается наименование племпредприятия (первые 3 цифры),  порода быка (две последующие цифры), номер быка (пять цифр), а затем последовательно по две цифры год, месяц и день получения спермы. Маркированные соломины в коробках помещают в настольную бактерицидную камеру и стерилизуют в течение двух часов.

Для автоматического наполнения соломин  разбавленной  спермой и их закупорки имеется специальная машина М6-АПА (или другие современные аппараты). В коробку машины помещается 700 соломин, а в  ее бункерочек – 6000 стеклянных шариков. До использования стеклянные шарики выдерживают сутки в растворе соляной кислоты (10 мл концентрированной кислоты на 1 л дистиллированной воды), промывают проточной водой, затем 3–4 раза дистиллированной водой и засыпают на сито с отверстиями 1,7 х 2,0 мм, чтобы удалить обломки. Высушенные шарики помещают в стеклянную банку и стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 180С в течение 1,5 ч.

Перед работой корпус машины протирают марлевой салфеткой; детали, непосредственно соприкасающиеся с соломинами и стеклянными шариками (бункера для шариков и соломин, укупориватели), обрабатывают спиртовым тампоном. Наконечники и сопла, медицинские поливинилхлоридные трубки и уплотнители стерилизуют кипячением.

Коробку с маркированными стерильными соломинами фиксируют рычагом у механизма подачи их на барабан, подсоединяют поливинилхлоридную трубку с соплом для подачи спермы, конец трубки с надетым наконечником погружают в емкость с разбавленной спермой. После включения машины сперма нагнетается  в соломинку с обеих сторон и закупоривается двумя стерильными цветными стеклянными шариками. В процессе работы следят, чтобы столбик воздушного пузырька был длиной 5–12 мм, а стеклянные шарики заталкивались на глубину 1,5–2 мм.

Наполненные спермой соломины берут в руку воздушными пузырьками вниз и встряхивают несколько раз для того, чтобы пузырьки переместились на середину.

Если используются пайеты Кассу, то сперма заполняется с одного свободного конца до смачивания пробочки из поливинилового спирта и бумаги, а второй конец запаивается ультразвуком. В них пузырек воздуха отсутствует. Пайеты этого типа могут иметь различный цвет (всего 18 цветов), что позволяет легче идентифицировать породу и класс производителя, удобнее и быстрее извлекать нужный образец спермы для использования.

После заполнения соломины раскладывают по 143 шт. в металлические рамки и сверху прижимают держателем. Рамки кладут одна на другую по 5 штук, помещают в коробку и ставят в холодильник ХЖС-300, в котором поддерживается температура около 4С. В холодильнике сперма постепенно и равномерно охлаждается до температуры 4С в течение часа (со скоростью 0,3–0,5С в мин). Выдерживают сперму при такой температуре в течение 3–4 ч и потом замораживают в биологических хранилищах на замораживающем устройстве – медном щите, который закрепляют на расстоянии 6–8 см от поверхности жидкого азота.

Для поддержания стабильной температуры на щите (минус 130...150С) после загрузки рамок с соломинами и обеспечения оптимальной скорости замораживания спермы необходимо под давлением 0,2–0,3 атм. подавать газообразный азот с вентиля газосброса транспортной цистерны. Конец шланга должен лежать на дне биологического хранилища. Если замораживание производится без обдува, тогда щит замораживающего устройства должен касаться поверхности жидкого азота.

Замораживание спермы ведется в течение 7 мин. После этого соломины переносят с помощью специальной воронки в пластмассовые стаканы, наполненные жидким азотом и закрепленные в  гнездах щита замораживающего устройства. Затем стаканы с соломинами быстро переносят в подготовленные канистры и размещают их в биологических хранилищах ХБ-0,5 или ХБ-0,2-1.

Многие зарубежные организации по искусственному осеменению и большинство племпредприятий Беларуси используют высокотехнологичное оборудование (MINITUB)  для маркировки соломин, наполнения и укупорки их стеклянными шариками или по методу Кассу, для автоматического контроля замораживания и упаковки замороженных соломин. Замораживание спермы барана. Разбавленную сперму  охлаждают в течение 2–3 ч до  +2...4С.  При этом флаконы  (полиэтиленовые  капельницы)  со спермой  погружают  в  кювету с теплой (20...25С)  водой и ставят в бытовой холодильник. После охлаждения кювету с флаконами погружают в тающий лед до момента замораживания спермы.

Сперму замораживают на поверхности сухого льда или на охлажденной до минус 80С фторопластовой пластине. Для обеспечения такой температуры пластину после охлаждения в жидком азоте поднимают  и устанавливают с помощью штатива на уровне верхнего края широкогорлого сосуда и выдерживают 4–6 мин.  После этого в  лунки пластины накапывают сперму по 0,2 мл. Как только сперма затвердеет, пластину опускают ниже и выдерживают над поверхностью жидкого азота на расстоянии 3–5 см в течение 1,5–2,0 мин,  а затем погружают на 1 мин в жидкий азот.  После окончания  замораживания пластину извлекают из азота и собирают гранулы в алюминиевые тубы или мешочки из тонкой алюминиевой  фольги.  Емкости  должны  быть промаркированы.  Замороженную  сперму  помещают в сосуд Дъюара на карантинное хранение на 28 дней.

Биотехника  размножения  сельскохозяйственных  животных. Ч а с т ь  3. Разбавление и хранение спермы. Осеменение самок сельскохозяйственных животных и птиц: методические  указания. / Белорусская государственная сельскохозяйственная  академия;  сост.  Г. Ф.  Медведев,    Н. И. Гавриченко,  И. А.  Долин

Комментарии   

0 #1 Ольга 14.06.2014 23:41
Спасибо за интересную статью!
Цитировать